口蹄疫病毒O型磁微粒化学发光抗体检测方法.pdf

口蹄疫病毒O 型磁微粒化学发光抗体检测方法 1 范围 本文件规定了《口蹄疫病毒O型磁微粒化学发光抗体检测方法》的试剂与器材、技术原理、操作步 骤、试验成立条件、结果计算及判定等内容。 本文件适用于猪、牛、羊等动物血清中口蹄疫病毒O型抗体的检测，可用于口蹄疫病毒O型抗体的 免疫筛查、辅助诊断。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 化学发光免疫分析 chemiluminescentimmunosssay;CLIA 是将化学发光和免疫分析结合起来的技术，通过标记的抗原或抗体与待测物进行一系列免疫反应， 最后以测定发光强度得出待测物含量。 4 符号与缩略语 下列缩略语适用于本文件。 FMDV-O：口蹄疫病毒O型（FootandMouthDiseaseVirusO） HRP：辣根过氧化物酶 （HorseradishPeroxidase） 5 试剂与器材 5.1 包被磁微粒混悬液，按照附录A 制备。 5.2 相关试剂的配制，按照附录B 配制。 5.3 全自动化学发光免疫分析仪，按照附录C进行操作。 5.4 移液器（50µL~1000µL）。 5.5 注射器（5mL、10mL）。 2 6 技术原理 本文件采用磁微粒化学发光--竞争法原理，用口蹄疫病毒O型VP1重组蛋白过量包被磁微粒，酶标 单抗与待检样品中的抗体竞争性的与包被抗原结合，通过抗原抗体反应，形成抗原-酶标抗体复合物、 抗原-待测抗体复合物；抗原-酶标抗体复合物催化发光底物液发出光子，其发光强度与口蹄疫病毒O型 抗体的含量成反比。 7 实验前准备 7.1 实验前准备 按照NY/T541中规定进行样本的采集与处理，期间做好个人防护。按常规方法抽取2mL～3mL血 液置洁净干燥的试管中，静置约60min，待血液凝固后4000r/min离心10min（也可将血液样本静置约120 min，待血液凝固自然析出血清），分离血清。要求血清清亮，无溶血、无污染。 若无上述条件分离血清，可直接用全血检测。全血样品容器中应加入下列抗凝剂中的任意一种： 0.1%肝素钠、阿氏液、3.8%～4.0%枸橼酸钠（0.1mL可抗1mL血液）、乙二胺四乙酸（EDTA）等抗凝 剂，采血后充分混合。 7.2 血清样本的存放与运输 按照NY/T541中规定进行血清样本的存放与运输。血清样本若在一周内检测，可置2℃～8℃条件 下保存。若超过一周检测，应置于-20℃以下冷冻保存。运输时注意冷藏，确保样品清亮无污染。采集 的血清样本可用冰袋或保温桶加冰密封等方式运输，运输时间应尽量缩短。按照相关规范进行样品的生 物安全标识。 7.3 全血样本的存放与运输 按照NY/T541中规定进行全样本的存放与运输。全血样本若在24h内检测，应置于4℃条件下保存； 若超过24h检测，应置于-20℃以下冷冻保存。采集的全血样本可用冰袋或保温桶加冰密封等方式 运输，运输时间应尽量缩短。按照相关规范进行样品的生物安全标识。 8 操作步骤 8.1 样品准备 将待检样品从2℃～8℃或-20℃冰箱取出，静置至室温。 8.2 仪器准备 参照磁微粒化学发光仪器系统操作说明，按设定的反应程序设置仪器参数，将分装有25 倍浓缩洗 涤液、酶结合物、发光底物A 和发光底物B 的试剂瓶分别插入仪器相应孔。开机自检，待仪器自检、 管路清洗1次、底物灌注完成后，方可进行样本检测。 8.3 加样 3 在样本架上依次加入阴、阳性对照和待检样本，加样量均为20µL/孔。 8.4 仪器检测 将阴、阳性对照和待检样本的样本架放入仪器样本仓，进行样本申请，选择FMDV-O型项目，点击 “开始”按钮进行检测。 8.5 读值 检测完成后，读取数据结果，打印报告。如本次检测完毕则清空废液、废料桶，管路清洗后