口蹄疫监测技术规范.pdf

口蹄疫监测技术规范 1 范围 本文件规定了口蹄疫监测原则、实验室检测方法、判定标准、结果统计和阳性动物处置等程序。 本文件适用于口蹄疫监测、流行病学调查等活动。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T18935 口蹄疫诊断技术 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T4139 兽医流行病学调查与监测抽样技术 GB19489 实验室生物安全通用要求 3 术语和定义 3.1 O-P液 Oesophageal-pharyngealfluids 牛、羊等动物食道-咽喉部分泌物 3.2 VP1结构蛋白 VP1structural protein VP1是口蹄疫病毒衣壳四种结构蛋白之一。在口蹄疫病毒四种结构蛋白中，VP1最易发生变异，也 是决定病毒抗原性的主要成份。VP1蛋白基因序列常用来进行遗传变异和分子流行病学溯源分析。 3.3 非机构蛋白3ABC Non-structural protein3ABC 3ABC是口蹄疫病毒非结构蛋白。口蹄疫非结构蛋白差异很小，不参与形成病毒粒子，主要参与病 毒的复制和调节宿主细胞对感染的反应。通过检测3ABC蛋白产生的抗体，可以鉴别自然感染动物和免 疫动物 3.4 采样单元 Samplingunit 2 同一饲养地、同一饲养条件下的畜禽个体或群体 4 监测采样方案制定 4.1 监测动物 猪、牛、羊、鹿、骆驼等口蹄疫易感偶蹄类动物。 4.2 监测范围 猪、牛、羊、鹿、骆驼等偶蹄类动物的各类养殖、交易、屠宰、无害化处理等场点。。散养户以自 然村作为监测采样单元。 4.3 监测样品类型 4.3.1 被动监测 典型发病动物可采集水泡液、水泡皮；若采集不到典型的水泡液、水泡皮，则采集病灶周围破溃 组织。临床表现不典型，但需做口蹄疫病原学检测的动物，活猪用棉拭子采样咽部分泌物或口水，猪屠 宰后可采集颌下淋巴结；牛、羊、鹿、骆驼等反刍动物可采集O-P液。为了保证采样质量，在采集活猪 咽部棉拭子和牛、羊采集O-P液时，禁止喂食或饮水12小时。 4.3.2 主动监测 4.3.2.1病原监测 按照NY/T4139 中证明无疫与发现疫病的抽样或以风险为基础的抽样开展监测采样。另外，选择 场群时，应考虑猪、牛、羊等偶蹄类动物的种畜场、规模饲养场、散养户、活畜交易市场、屠宰场的比 例。 4.3.2.2抗体监测 按照NY/T4139 中估计流行率的抽样开展监测采样。另外，选择场群要综合考虑猪、牛、羊等偶 蹄类动物的种畜场、规模饲养场、散养户、活畜交易市场及屠宰场的比例，以及不同种群动物的年龄和 免疫次数的差异。 4.3.3 样品要求 样品的采集、保存、运输、按照GB/T18935和NY/T541 进行。样品处理的生物安全措施按 照GB19489 要求进行。另外，结合所能提供的经费、时间限制和人力资源等条件确定样本量。口蹄疫 监测采样，每个采样单元采样数量一般不少于30份，不足30份的应采尽采。采集的组织须与全血一一 对应，牛、羊等反刍动物同步采集O-P 液和全血，屠宰场猪采集颌下淋巴结和全血。全血采集每头（只） 不少于5mL，牛和羊O-P 液不少于3mL。 5 检测方法 3 5.1 病原检测 5.1.1 被动监测中，对采集的临床发病动物样品按照GB/T18935进行病原学检测。核酸阳性样品用 RT-PCR方法扩增结构蛋白VP1基因，并测序确认毒株基因型，测序结果可用于后续分析。 5.1.2 主动监测中，牛、羊等反刍动物O-P液、猪口腔棉拭子、猪颌下淋巴结等组织样品用荧光定 量RT-PCR方法进行初筛，对于核酸阳性样品，则采用RT-PCR方法扩增结构蛋白VP1基因，并测序确认 毒株基因型。 5.1.3 根据样品种类及样品质量，采用细胞或乳鼠进行病毒分离。 5.2 抗体检测 5.2.1 非结构蛋白3ABC抗体检测 检测方法采用GB/T18935 中3ABC