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病毒感染的诊断与防治 病毒感染的诊断与防治 第一节病毒感染的诊断 常用的病毒学诊断方法包括： 病毒的分离鉴定 病毒的血清学检查 病毒蛋白和核酸的检测 一、标本的采取与送检 一、标本的采取与送检 应注意下列原则： 应注意下列原则： 1.对本身带有杂菌 (如咽拭子、粪便) 或易 1.对本身带有杂菌 (如咽拭子、粪便) 或易 受污染的标本，要进行病毒分离培养时， 受污染的标本，要进行病毒分离培养时， 应使用抗生素。 应使用抗生素。 2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低温 2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低温 保存并尽快送检。 保存并尽快送检。 3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和病 3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和病 后2～3w 内各取1份血清，以便对比双份 后2～3w 内各取1份血清，以便对比双份 血清抗体效价的动态变化。 血清抗体效价的动态变化。 二、病毒的分离与鉴定 (一) 病毒的分离　 1.动物接种 是最原始的病毒培养方法，根据病毒种 类不同，选择敏感动物及适宜接种部 位，如嗜 神经性病毒（狂犬病毒）可 接种于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔 角膜或皮内。 2.鸡胚培养 鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化 9～14天的鸡胚，根据病毒种类不同， 将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位， 最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿 囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。 3.组织培养法 (tissueculture) 或细胞 培养 (cellculture)法 是将离体活组织块或分散的组织细胞加 以培养的技术总称，为病毒分离鉴定中 的最常用的基本方法。 病毒在培养细胞中增殖的指标 1. 细胞的变化 ① 有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变， 称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、 聚集、坏死、溶解或脱落等。 ② 有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜， 可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融 合细胞。 ③ 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养 细胞中形成胞浆或核内的包涵体。 病毒培养时出现的CPE 2.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd) 2.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd) 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞 膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)，具 膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)，具 有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的 有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的 能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测定 能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测定 具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相 具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相 应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA，HAd 应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA，HAd 不再发生，称红细胞吸附抑制试验。 不再发生，称红细胞吸附抑制试验。 3.干扰现象(interference) 3.干扰现象(interference) 某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他 某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他 易于测出的变化(如HAd)，但能干扰在 易于测出的变化(如HAd)，但能干扰在 其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病 其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病 毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能 毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能 干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的增 干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的增 殖，从而阻抑后者所特有的CPE 。 殖，从而阻抑后者所特有的CPE 。 4.细胞代谢的改变 4.细胞代谢的改变 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH 值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后 值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后 发生了变化。这种培养环境的生化改变 发生了变化。这种培养