黄萎病菌激活蛋白的提取及对棉花发芽的影响-《江苏农业科学》(2017年5期).docx

龙源版权所有 黄萎病菌激活蛋白的提取及对棉花发芽的影响作者：张海萍 马前程 麻浩 哈那提别克 顾爱星来源：《江苏农业科学》2017年第05期 摘要：为探索棉花黄萎病的生物防治方法，对棉花黄萎病病菌激活蛋白的提取方法及活性进行了研究。将从感染黄萎病的棉花组织中分离培养的棉花黄萎病病菌置于不同温度、不同转速条件下进行培养，对棉花黄萎病病菌的激活蛋白进行提取，用1 000倍、1 500倍、2 000倍激活蛋白稀释液分别处理2个棉花品种（新陆中11号、新陆中50号）的种子，检测激活蛋白对棉花种子发芽率的影响。结果表明，获得该菌最佳发酵条件为26 ℃、200 r/min、72 h，在此条件下，菌丝干质量达5.88 g/L。经SDS电泳检测发现，在分子量为25 ku附近有1条集中的电泳谱带；激活蛋白稀释液能够提高这2种棉花种子的发芽率，其中稀释1 500倍时效果最明显。结果表明，棉花黄萎病病菌激活蛋白具有高效的诱导激活活性，可为研制低成本的蛋白生物农药提供理论依据。 关键词：棉花；黄萎病菌；激活蛋白；发芽率 中图分类号： S435.621.2+4文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2017）05-0096-03 棉花黄萎病是一种世界性病害，其危害大、持续时间长、可导致巨大经济损失。棉花黄萎病的发生是因为土壤含大量菌，病原菌产生分化，缺乏抗棉花黄萎病的优良品种，温湿度适宜条件不好，缺乏对棉花黄萎病严格的检疫制度和有效快速的检疫手段等。1935年棉花黄萎病从美国传入我国，在陕西泾阳、山西运城、山东高密和河南安阳等地区相继发生[1]。1970年以后，我国12个省（市、区）均发生了棉花黄萎病，主要集中在黄河流域棉区。据统计，2000年棉花黄萎病发病面积已经达到300万hm2 [2]，种子交流使病原菌的种类越来越多，形成了复合种群（基因型）[3]。有研究表明，棉花黄萎病病菌的致病力均存在分化和变异，造成棉花黄萎病逐年加重的主要原因之一是强致病力菌系的出现[4]。农药对农业生产做出了巨大贡献，但是副作用很多，如环境污染、生态破坏、病虫抗药性和农产品安全性等问题，为解决这些问题出现了生物农药、生物肥料，使用生物农药、生物肥料是确保现代农产品安全生产、保护环境的关键技术措施，用生物肥料代替农药已经成为一种趋势。美国康奈尔大学韦忠民博士提出了过敏蛋白具有抗病性功能[5]。2001年美国Cornell 大学和EDEN 生物科技公司從过敏反应蛋白中共同开发和研制了具有抗病防虫功能的蛋白质分子生物新农药Messenger [6]。这[JP2]种产品在多种大田作物、经济作物上效果十分明显，对多种病虫防治效果达50%～80%，增产10%～20%，是一种较为理想的环境友好型生物农药。目前，具有代表性的微生物蛋白农药有过敏蛋白（harpin）、隐地蛋白（crypogein）[7]和激活蛋白（activator）[8]等几种类型。激活蛋白的作用机理在性质上类似动物免疫的一种抗病机制，无毒，在植物体内和土壤中易分解、无残留，是一种适合农业需求和环境友好的生物农药[9]。[JP] 黄萎病菌激活蛋白主要通过激活植物体内分子免疫系统，提高植物自身免疫力；通过激发植物体内的一系列代谢调控，促进植物根、茎、叶生长和提高叶绿素含量，从而提高作物产量。 本试验为探索棉花黄萎病的生物防治方法，对棉花黄萎病病菌激活蛋白的提取及活性进行了初步研究。从感染黄萎病的棉花组织中分离培养棉花黄萎病病菌，置于不同温度下以不同转速进行培养，对棉花黄萎病病菌的激活蛋白进行提取，用激活蛋白处理棉花种子，检测激活蛋白对棉花种子发芽的影响，探明棉花黄萎病病菌激活蛋白是否具有诱导激活活性，为研制低成本的蛋白生物农药提供理论依据。 1材料与方法 1.1材料、仪器与试剂 1.1.1菌种棉花黄萎病病菌，采自石河子棉田的带病棉花植株上，病原菌在新疆农业大学实验楼生物技术实验室进行分离培养，经鉴定为棉···试读结束