发光免疫技术检验课件.ppt

分析步骤 1.甲状腺激素 2．生殖激素 3．垂体激素和皮质激素 4．贫血因子 5．肿瘤标志物 6．感染性疾病 7．糖尿病 胰岛素、血清C-肽、血浆胰高糖素等。 8．心脏标志物 9．病毒标记物 10．过敏性疾病 11．治疗药物监测 1．名词解释：化学发光免疫分析、化学发光剂 2．化学发光免疫分析技术根据发光剂的不同可分为哪几类型？ 3．三丙胺在电化学发光中起什么作用？ 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态跃迁到激发态，然后再返回到基态，并释放光子的过程。化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化学能使分子激发而发光。化学发光免疫分析是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术，分为直接化学发光免疫分析，化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。 辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图 该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。 ㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析 碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图 分配样品, 磁颗粒 和试剂 孵育 使反应物 结合 在磁场中 清洗去除 未结合物质 加入 底物 产生 信号 孵育, 促使信号 的产生 信号 检测 电化学发光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记 抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体， 在电场中因电子转移而发生特异性化学发光 反应，它包括电化学和化学发光两个过程。 三、电化学发光免疫分析 在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相应的抗原 (抗体)发生免疫反应后，形成磁性微粒包被抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，同时引人TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比。 电化学发光免疫分析示意图 电化学发光免疫测定示意图 标记磁颗粒在电场中发光工作示意图 四、临床应用 思考题 小 结 * 第十章 化学发光免疫 分析技术 发光免疫分析:是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。 第一节 概 述 发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回到基态，并释放光子的过程。 根据形成激发态分子的能量来源不同可分为: 光照发光、生物发光、化学发光等。 光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可见光（荧光）。 生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来。 化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂)在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。 一、化学发光 一些化学反应能释放足够 的能量把参加反应的物质激 发到能发射光的电子激发态， 若被激发的是一个反应产物 分子，则这种反应过程叫直 接化学发光。反应过程可简单地描述如下： A十B C* C* C＋ h·γ 其中γ为光子，C*表示C处于单线激发态。 若激发能传递到另一个未参加化学反应 的分子D上，使D分子激发到电子激发态， D分子从激发态回到基态时发光，这种过 程叫间接化学发光。反应过程可表示如下： A十B C* C*十D C十D* D* D十h·γ 化学发光效率决定于生成激发态产物分子的化学激发效率（φCE）和激发态分子的发射效率（φEM）。化学发光反应的发光效率、