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不同来源益生素对仔猪分泌型免疫球蛋白a和肠道菌群的影响 益生素是一种新型的微生态细菌制剂，广泛应用于动物和家禽养殖。它不仅具有抗逆性和促进生长的作用，而且避免了抗逆性的缺点。这些益生素主要包括宿主体内的原籍菌,如:双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、大肠杆菌等,以及部分外籍菌,如芽孢杆菌。其中乳酸杆菌是应用最早、研究最多的益生素之一。芽孢杆菌是应用最广泛的一类饲用益生素。但是对益生素的作用机理及其对宿主免疫功能的影响研究还比较少,尤其是原籍菌和外籍菌在仔猪体内的免疫促进作用和对肠道主要细菌的影响,以及它们之间是否存在差异,在国内外均未见报道。本试验比较了猪源约氏乳酸杆菌和外源枯草芽孢杆菌对仔猪肠道分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和正常细菌的影响,为益生素在养猪生产上的合理应用提供一定的理论和试验依据。 1 材料和方法 1.1 试验材料 1.1.1 试验设计与日粮 1~3日龄杜×长×大健康仔猪72头,成都蓉都养殖有限公司提供。根据遗传性状、体重、日龄和性别将仔猪随机分为3个处理组,每个处理设3个重复,每个重复8头猪。试验饲粮分别为:①基础饲粮(对照组);②基础饲粮+0.1%约氏乳酸杆菌JJB3;③基础饲粮+0.1%枯草芽孢杆菌JS01。基础日粮参照NRC(1998)猪营养需要设计,采用玉米-豆粕基础日粮,消化能13.44 MJ/kg ,粗蛋白质21.1%,赖氨酸1.452%。猪舍温度(29±1)℃,试验猪自由采食和饮水,饲养管理和免疫程序按照常规进行。 1.1.2 细菌、沙门氏菌 约氏乳酸杆菌JJB3,分离自健康仔猪降结肠肠壁,耐酸耐胆盐,拮抗致病性大肠杆菌和沙门氏菌,活菌数为1.5×109CFU/g,四川农业大学动物微生态研究中心提供。枯草芽孢杆菌JS01,分离自土壤,活菌数为1.0×109CFU/g,四川农业大学动物微生态研究中心提供。 1.1.3 选择性培养基 选择性培养基按文献配制。 1.2 测试指标和方法 1.2.1 益生素混食 5日龄开始用所配饲料进行诱食,10日龄之前试验组每头猪每天灌服2 g益生素,对照组灌服2 mL生理盐水。10日龄之后将益生素按0.1%比例拌入饲料自由采食。28日龄断奶。试验期35 d。 1.2.2 粪样的采集 分别于仔猪7、14、21、29和35日龄在每重复组中随即选择2头仔猪,采集新鲜粪样2份,每份5 g左右,置-70℃冰箱保存备用。一份用于检测粪样SIgA,另一份用于检测肠道菌群。 1.2.3 粪样中siga检测 采用Bethyl公司(美国)的猪IgA双抗夹心ELISA定量试剂盒检测粪样中SIgA,按试剂盒说明书进行操作。96孔酶标板为Gene公司产品,酶标仪(680型)为Bio-Rad公司产品。 1.2.4 菌落计数及活菌数测定 肠道菌群变化参照文献测定,即准确称取均匀混合的0.5 g粪样,用生理盐水10倍递增稀释至10-7,选取适当稀释度的稀释液在不同的选择性培养基平板上滴种,每个稀释度3个重复。然后分别进行厌氧培养或好氧培养24~72 h,菌落计数并计算每克粪样的活菌数(lg CFU/g粪样)。 乳酸杆菌、双歧杆菌、消化球菌、肠球菌、梭菌和大肠杆菌分别用MRS、MRS+X-gal、PS、EC、CD和EMB选择性培养基培养计数。 1.2.5 生产力试验 仔猪分组后记录初生重量,在35日龄试验结束时称重,计算各处理组仔猪日增重。 1.2.6 腹泻指数的测定 试验期间每天观察仔猪腹泻情况,并按照表1的标准评分,计算腹泻指数,即腹泻头次乘以相应的腹泻得分。 1.3 方差分析和t检验 试验数据均采用SPSS 13.0统计处理软件进行方差分析和配对T检验分析,差异显著者用Duncan氏新复极差法进行多重比较。数据用平均值±标准差表示。 2 结果 2.1 枯草芽孢杆菌对7. 采用双抗夹心ELISA试剂盒分别检测7、14、21、29和35日龄仔猪粪样中SIgA含量。由表2结果看出,同一日龄不同处理组仔猪的粪样SIgA含量差异不显著,但是,从7日龄开始,各试验组和对照组SIgA水平都呈下降趋势,尤其是29日龄断奶至35日龄期间SIgA水平显著降低(P<0.05)。对照组在21~29日龄,SIgA水平显著低于7日龄(P<0.05)。枯草芽孢杆菌组仔猪在7~21日龄之间抗体水平下降不显著,只是29日龄抗体水平显著低于7日龄(P<0.05);与其余组相比,虽然差异不显著,但是SIgA含量低于对照组和约氏乳酸杆菌组。约氏乳酸杆菌组在7日龄至29日龄期间,抗体水平变化不明显,差异不显著,29日龄断奶时,抗体水平高于其他2个处理组,但差异不显著。该结果说明枯草芽孢杆菌和约氏乳酸杆菌虽然不能改变仔猪从出生到35日龄期间SIgA水平下降的趋势,但是均可以延缓仔猪断奶前抗体水平下降的速度,而且约氏乳酸杆菌的效果优于枯草芽孢杆