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基因工程是当前生命科学研究的热点和前沿之一,基因诊断、基因治疗、基因产品在人们生活中的出现日渐频繁。基因工程的原理、技术与应用是选修3的重要考点,且经常与胚胎工程、微生物的培养、克隆技术、组织培养等知识进行综合考查。动物细胞培养及应用、植物组织培养与植物体细胞杂交在农业生产中的应用也是重要的考点。 ;第1讲 基因工程与细胞工程
1.(2011·四川)北极比目鱼中有抗冻基因,其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列,该序列重复次数越多,抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图,有关叙述正确的是 ;A.过程①获取的目的基因,可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B.将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因,不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白
C.过程②构成的重组质粒缺乏标记基因,需要转入农杆菌才能进行筛选
D.应用DNA探针技术,可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达;解析 因为一种氨基酸可能对应多种密码子、真核生物体内的基因复杂等因素,导致逆转录合成的目的基因与原基因有较大的差异,所以人工合成的目的基因不能用于比目鱼基因组测序,A选项错误;抗冻蛋白的11个氨基酸的重复序列重复次数越多,抗冻能力越强,并不是抗冻基因的编码区重复次数越多抗冻能力越强,抗冻基因编码区依次相连形成的新基因已不是原来的抗冻基因,因此不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白,B选项正确;农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞的最常用方法,不是为了筛选含有标记基因的质粒,C选项错误,应用DNA探针技术,可以检测转基因植物中目的基因的存在,但不能完成对目的基因表达的检测,D选项错误。
答案 B;1.基本工具;2.基因工程的基本操作程序
(1)获取目的基因的方法
①从基因文库中获取;
②利用PCR(聚合酶链式反应)技术扩增目的基因;
③人工合成。
(2)基因表达载体的构建(基因工程的核心)
①构建目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用;
②一个基因表达载体的组成:目的基因、启动??、终止子、标记基因等。;③构建方法
(3)将目的基因导入受体细胞——转化
;②受体种类不同,所用的受体细胞种类也不相同。
植物——一般为体细胞(可经组织培养成为完整个体)。
动物——受精卵(因为体细胞的全能性受到严格限制)。
③转化实质:目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。
(4)目的基因的检测与鉴定
;2.(2011·北京东城区模拟)对下面制备单克隆抗体的过程示意图的叙述不正确的是
A.①表示B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均是从小鼠的脾脏中提取的
B.④中的筛选是通过抗原、抗体反应进行的
;C.②促进细胞融合的过程可以利用聚乙二醇作介导
D.⑤可以无限增殖
解析 ①表示提取过程,指的是从小鼠的脾脏内提取B淋巴细胞,从骨髓中提取骨髓瘤细胞,故A项错误。
答案 A
1.植物组织培养和动物细胞培养的比较
;取材;结果;2.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
;过
程;【特点提示】 在诱导剂的作用下进行细胞融合,形成的杂种细胞有三种;AA型、BB型和AB型,只有AB型才是我们所需的杂种细胞,因此需要用选择培养基进行筛选。
; (2011·海南)回答有关基因工程的问题:
(1)构建基因工程表达载体时,用不同类型的限制酶切割DNA后,可能产生黏性末端,也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接,则应选择能使二者产生________(相同、不同)黏性末端的限制酶。
(2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时,构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等,其中启动子的作用是_____________________________________。在用表达载体转化大肠杆菌时,常用________处理大肠杆菌,以利于表达载体进入;为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA,可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交,该杂交技术称为___________________________________________________。 ;为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成_____,常用抗原-抗体杂交技术。
(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞,先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中,然后用该农杆菌感染植物细胞,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。
【课堂笔记】 【解析】 (1)限制酶能识别特定的DNA序列,并在特定位点上切割DNA,形成黏性末端或平末端;要使目的基因和质粒直接进行连接,应使用同一种限制酶进行切割,使二者产生相同的黏性末端。 (2)启动子为DNA序列,其具有RNA聚合酶结合位点,能启动转录,合成RN
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