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肿瘤学动物实验技能培训 第一页，共二十二页，2022年，8月28日 一、常用实验动物及选择——品系选择 名称 毛色 免疫特性 适合实验 BALB/c 白色 野生型 同基因型肿瘤实验 C57BL 黑色 野生型 同基因型肿瘤实验 Nude BALB/c,裸鼠 无毛 胸腺缺陷，T细胞缺陷 人移植瘤实验 SCID 白色 T、B细胞减少，细胞免疫和体液免疫缺陷，巨噬细胞和NK细胞正常 免疫功能重建，肿瘤学 NOD/SCID 白色 与SCID相比，NK细胞减少 免疫功能重建，肿瘤学 NOG/NSG 白色 IL-2受体缺陷，与NOD/SCID相比，天然和获得性免疫缺陷更高 免疫功能重建，肿瘤细胞治疗 BALB/c C57BL 裸鼠 SCID NOD/SCID NOG/NSG 第二页，共二十二页，2022年，8月28日 成年动物的年龄、体重和寿命比较 ? 小鼠 大鼠 豚鼠 兔 狗 成年日龄（天） 65～90 85～110 90～120 120～180 250～360 成年体重（g） 20～28 200～280 350～600 2000～3500 8000～15000 平均寿命（年） 1～2 2～3 ＞2 5～6 13～17 最高寿命（年） ＞3 ＞4 ＞6 ＞13 34 一、常用实验动物及选择——年龄选择 一般购买6-8周小鼠，用于实验 第三页，共二十二页，2022年，8月28日 二、小鼠的饲养——环境 微生物控制等级选择 普通级动物：示教、预实验 清洁级动物：适用大多数科研。 无特定病原体动物（SPF）：为理想的健康动物，适用于所有科研、检定。 无菌动物（GF）：适用于特殊研究。 第四页，共二十二页，2022年，8月28日 动物室环境控制要求值 项目 控制要求值 备注 温度 21～27℃ 按动物品种而有若干差别 湿度 45～55% 气流速度 10～25cm/秒 避免直吹风 换气次数 8～15次/小时 100%新鲜空气（如使用循环空气，不应超过总空气量的1/3） 照明 75～300lux 定时人工照明（分置小瓦数日光灯） 氨浓度 20ppm以下 噪音 50分贝以下 无动物时（有动物时，除狗居外，不高于65分贝） 二、小鼠的饲养——环境 第五页，共二十二页，2022年，8月28日 动物饲养密度 动物饲养密度应符合卫生标准，有一定的活动面积，不能过分拥挤。 各种动物所需笼具的面积和体积因饲养目的而异，哺乳期所需面积较大，一般小鼠4-6只/笼。 二、小鼠的饲养——密度 第六页，共二十二页，2022年，8月28日 二、小鼠的饲养——垫料、饲料、水 垫料、饲料均需经过辐照并密封包装。 水，自来水121度高压灭菌20min。 饲料选择营养均衡的配方饲料即可，特殊情况才选 择高蛋白，高脂肪饲料。 第七页，共二十二页，2022年，8月28日 三、肿瘤建模 肿瘤模型类型：皮下移植瘤、肺转移模型、原位移植瘤； 查阅文献确定细胞接种浓度：一般1*106 个细胞左右； 预实验：以2倍比例选择三个细胞浓度开展预实验； 准备细胞：细胞重悬于PBS、生理盐水或基础培养基中，定量； 接种：皮下接种可选择乙醚麻醉，100 ul/位点；肺转移 尾静脉注射，用小鼠固定器，200ul/只； 对于皮下移植瘤，如需细胞数量较大，可以接种组织块儿； 皮下接种部位：Flank，背颈部，腋窝。 第八页，共二十二页，2022年，8月28日 四、标记与分组 编号与标记方法 染色法 剪耳法 穿耳孔法 标牌法 烙印法 剪毛法 第九页，共二十二页，2022年，8月28日 在每组动物不超过l0只或一个实验不超过40只的情况下适用 染色剂：3-5％苦味酸溶液，可染成黄色 染色法：单色涂染法 四、标记及分组——单色染色法 第十页，共二十二页，2022年，8月28日 涂染原则：从左到右、从上到下 左前肢为1号、左侧腹部2号、左后肢3号， 两耳后部4号、背部5号、后肢背部6号， 右前肢7号、右侧腹部 8号、右后肢9号 头部为40号、尾巴根为10号。 方法步骤 四、标记及分组——单色染色法 第十一页，共二十二页，2022年，8月28日 在每组动物不超过100只的情况下适用 常用染色剂：3-5％苦味酸溶液，可染成黄色，作为“个”位数 常用染色剂：0.5%中性红或品红溶液，可染成红色，作为“十”位数 四、标记及分组——双色染色法 第十二页，共二十二页，2022年，8月28日 用两种颜色同