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进出口食品中肠杆菌科检验方法－Petrifilm?测试片法 什么是肠杆菌科？ 据细菌学新的分类，肠杆菌科现己包括肠道病原性和非病原性的艾希氏、志贺氏、爱德华氏、沙门氏、亚利桑那、枸橼酸杆菌、克雷伯氏、肠杆菌、团聚肠杆菌、哈夫尼亚、沙雷氏、变形杆菌、耶尔森氏、欧文14个菌属及其他9个菌群的细菌。故以其作为指标菌则较大肠菌群等指标菌更敏感，更准确。 革兰氏阴性 无芽孢杆菌 氧化酶阴性 发酵葡萄糖产酸或产酸产气 习惯生长于肠道、土壤、水和蔬菜 在干燥环境中存活性差 对热敏感 部分对人体有致病性 好氧或兼性厌氧发酵型G-杆菌 氧化酶阴性 氧化酶阳性 肠杆菌科 乳糖发酵 非乳糖发酵 埃希氏菌 克雷伯氏菌 柠檬酸杆菌等 沙门氏菌 志贺氏杆菌 耶尔森氏菌，普罗威登斯菌等 从四种食品中共分离出肠杆菌科中九个菌属的十五种细菌。除脱脂淡奶粉外，从其它三种食品中均分离出了阴沟肠杆菌；在速冻方便食品中，克雷伯氏菌为优势菌；在脱水白罗卜和脱脂淡奶粉中均检出了团聚肠杆菌；而在冻鱼片中，检出的肠杆菌科属比较多，表明其污染源较为复杂。特别值得注意的是在冻鱼片中还检出沙雷氏菌；在冻菜卷中还检出了志贺氏菌。目前，在我国仍广泛采用大肠菌群作为指标菌，很少以肠杆菌科作为食品卫生指标菌，但对欧洲出口食品时有肠杆菌科检测计数要求。 标 准 意 义 肠杆菌科作为食品卫生指标菌在欧洲已有多年历史，对其检验方法不少学者曾进行了研究。目前北欧食品分析委员会（NMKL）及ISO已制定了食品中肠杆菌科检验的标准方法。包括了直接增菌和前增菌的定性方法；菌落计数和带恢复的MPN定量方法。近年来，随着对外贸易的发展,欧洲一些国家己对我国出口的某些食品和动物饲料提出了检测和限量要求。且将其作为国际间食品微生物学实验室质量控制、水平测试的必测项目之一。 速食食品的微生物指标 肠杆菌科的传统检测法 平板计数法 Violet Red Bile 葡萄糖琼脂(VRBG) 或Violet Red Bile 乳糖琼脂＋1％葡萄糖(VRBL+G) 36?1?C, 培养24 h, 计数红色菌落(直径?0.5 ?m) MPN法 煌绿葡萄糖肉汤(BGGB) 9管BGGB发酵，VRBG琼脂分离，生化鉴定 进出口食品中肠杆菌科检验方法－ Petrifilm?测试片法 标准文本 1.范围 本标准规定了进出口食品中肠杆菌科检验方法－Petrifilm?测试片法。 本标准适用于进出口食品中肠杆菌科的计数。 2.规范性引用文件 GB/T 4789.1 食品卫生微生物学检验 总则 SN 0330 出口食品中微生物学检验通则 术语和定义 肠杆菌科 Enteroacteriaceae 革兰氏阴性无芽孢杆菌，有周鞭毛，需氧或兼性厌氧，还原硝酸盐为亚硝酸盐，发酵利用葡萄糖产酸或产气，氧化酶阴性。 设备和材料 天平：感量0.1g。 均质器（旋转式或拍击式）。 培养箱：44℃±0.5℃。 放大镜或标准菌落计数器。 Petrifilm?测试片压板。 培养基和试剂 Petrifilm?肠杆菌科测试片。 PetrifilmTM肠杆菌科测试片 含有改良的VRB葡萄糖培养基 肠杆菌科为红色带黄色区域，或带气泡的菌落，或带有两者的菌落 含有酸检测的pH指示剂 培养时叠放片数小于20 培养时间24 h PetrifilmTM 肠杆菌科测试片 取样 取样和样品运送按GB/T 4789.1或SN 0330规定执行。 操作步骤 样品制备 液体食品 无菌取样25mL放入装有225mL稀释液的灭菌容器，振摇混匀，制成1:10的样品匀液。 固体和半固体食品 无菌取样25g放入装有225mL稀释液的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1min～2min，或无菌取样25g放入装有225mL稀释液的灭菌均质袋内，均质器均质0.5min～1min，制成1:10的样品匀液。 样品制备 检样稀释 用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入装有9mL生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打3～5次，或采用振荡器使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。 根据对样品污染情况的估计，按上述操作，依次制成系列十倍递增样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。 接种 对于每一个样品，选择适宜的2个～3个连续稀释度的样品稀释液检验。 将肠杆菌科测试片置于平坦表面处，揭开上层胶膜，用移液器吸取1mL稀释液，垂直滴加在肠杆菌科测试片的中央，将上层膜缓慢盖下，注意避免产生气泡，将压板（平面朝下）放置在上层膜中央，轻轻压下