植物愈伤组织诱导培养实验指导.pdf

- - 植物组织培养基的配制与植物愈伤组织诱导 一、 实验目的； 通过植物组织培养基和植物愈伤组织诱导实验的学习和训练，使学生了 解植物组织培养的基本原理和操作技术，初步掌握 MS 固体培养基制备 方法、外植体的常规灭菌技术以及愈伤组织诱导方法。 二、 实验原理： 根据植物细胞全能性原理，培养植物材料。即在无菌条件下，将植 物的器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）放在人工培养基上进行培 养，通过细胞分裂，形成一团薄壁细胞，即愈伤组织。愈伤组织可以在 适宜的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下进行再分化，重新 产生出植物的各种器官和组织，进而发育成完整的植株。 三、实验容 实验包括以下 3 部分容： 实验 1-1、植物组织培养基母液的配制和保存 实验 1-2、MS 培养基的配制与灭菌 实验 1-3、胡萝卜愈伤组织的诱导 实验 1-1 植物组织培养基母液的配制和保存 1、目的要求 学习植物组织培养基母液的配制方法，为培养基的配制 做准备。 2 、基本原理 - .可修编- - - 植物培养基是植物离体培养的组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离 体培养材料提供近似活体生存的营养环境，主要包括水、大量元素、微 量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝固剂和植物生长调节等物质。 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将培养基成分首先配 制成比实际培养基浓度大若干倍的母液，然后在配制培养基时，再根据 所需浓度，按比例稀释。本实验以 MS 培养基为例，学习培养基母液的 配制。 MS 培养基母液可分为：MS 大量元素母液、MS 微量元素母液、MS 铁盐 母液和 MS 有机化合物母液等。另外，还要配制生长激素母液，在不同 类型的培养基中使用。 3 、实验仪器设备和试剂 3.1 仪器、用具 分析天平、酸度计（或 pH 试纸）、冰箱、药匙、玻棒、称量纸、滴管、 洗瓶、记号笔、烧杯 （50ml 、100ml、200ml ）、容量瓶 （100ml、500ml 、 1000ml ）、磨口试剂瓶 （100mL、200mL 、500ml 、1000ml ）、量杯、量 筒、移液抢、微波炉等。 3.2 试剂 （1 ）95% 乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。 （2 ）MS 培养基成分： ① 大量元素( 母液 Ⅰ) ：NH NO KNO CaCl .2H O 、MgSO .7H O 、KH PO ； 4 3 、 3 、 2 2 4 2 2 4 - .可修编- - - ②微量元素( 母液Ⅱ) ：KI、H BO MnSO .4H O 、ZnSO .7H O 、Na MoO .2H O 、 3 3 、 4 2 4 2 2 4 2 CuSO .5H O 、CoCl .6H O ； ③铁盐( 母液Ⅲ) ：FeSO .7H O 、Na .EDTA.2H O ； 4 2 2 2 4 2 2 2 ④有机成分( 母液, 维生素和氨基酸) ：肌醇、盐酸吡哆醇( 维生素 B ) 、烟 6 酸(V ) 、盐酸硫胺素( 维生素 B ) 、甘氨酸；