生物化学实验教案.pptxVIP

生物化学实验第一页，共一百零四页。实验 Folin-Wu法定量测定血糖的含量一、目的要求1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。2、学会制备无蛋白血滤液。第二页，共一百零四页。二、实验原理Cu2+( CuSO4 )+葡萄糖 Cu+(Cu2O) Cu2O +酸性钼酸试剂 蓝色钼化合物 OD420比色 无蛋白血滤液中的葡萄糖和碱性硫酸铜溶液共热反应，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）,Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝 。 血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。第三页，共一百零四页。二、实验仪器1、新鲜兔子血 2、滤纸 3、血糖管（25ml）4、奥氏吸管（1ml） 5、锥形瓶（50ml） 6、 漏斗7、电炉 8、水浴锅 9、7200型可见分光光度计 血糖管奥氏吸管7200型分光光度计第四页，共一百零四页。四、实验试剂 1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。2、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。3、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。4、碱性硫酸铜溶液 A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml. B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。 临用时，A液：B液=15：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。第五页，共一百零四页。5、酸性钼酸盐溶液： 称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。 第六页，共一百零四页。五、实验步骤1、无蛋白血滤液的制备：用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂—草酸钠）1ml,缓缓放入50ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀。再加0.33mol/LH2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/L H2SO41—2滴）。用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml全血。第七页，共一百零四页。2、血糖的定量测定： 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入1ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加1ml标准葡萄糖液；用奥氏吸管吸取无蛋白血滤液1ml，放入第三支血糖管中。然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后各加4ml酸性钼酸盐溶液。一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420波长处比色，以空白管调节零点。第八页，共一百零四页。六、结果计算： 按下式计算100ml全血中所含血糖的含量m=OD1/OD2× C× 10× 100式中:m=100ml全血中含血糖毫克数C=标准液葡萄糖含量（0.1mg/ml）OD1=样品液光密度值OD2=标准液光密度值第九页，共一百零四页。实验肝糖元的提取和鉴定一、实验原理 糖原在浓碱中稳定，将肝组织先置于浓碱中加热，是蛋白质及其他成分分解而保留肝糖元。再用浓硫酸使糖原脱水生成糖醛衍生物，衍生物和蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准葡萄糖一起比色定量。第十页，共一百零四页。二、实验仪器1、 新鲜肝脏2、 100ml容量瓶3、 7220分光光度计4、 水浴锅5、 试管(ml、2ml、5ml)第十一页，共一百零四页。三、实验试剂1、0.9%NaCl溶液：0.9gNaCl溶于100ml蒸馏水中2、30%NaOH溶液：30gNaOH溶于100ml蒸馏水中3 、标准葡萄糖溶液（0.05mg/ml）：准确称取5mg分析纯葡萄糖（预先在110干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定容至100ml.4、显色剂：称取0.2g蒽酮加入100ml浓硫酸中。此试剂不稳定，以 临用时配用为宜，冰箱保存可用4—5天第十二页，共一百零四页。四、实验步骤 1、迅速处死小白鼠，立即取出肝脏，用0.9%N