『深度剖析』新冠病毒各种检测方法优缺点对比(1).pdf

Word文档 『深度剖析』新冠病毒各种检测方法优缺点 对比 一检测原理： 新型冠状病毒常用的核酸诊断方法有两种：病毒核酸特异基因检测和 病毒基因组测序。最常见的检测新型冠状病毒特异性核酸序列的方法 是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。由于新型冠状病毒是RNA病毒， 试剂盒检测基本都采纳反转录加实时聚合酶链式反应法（RT-PCR）， 扩增病原体的核酸 (RNA) ，同时通过荧光探针实时检测扩增产物。 在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该 探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬 灭荧光基团。探针完整时，报告基团放射的荧光信号被淬灭基团汲取； 如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿 模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分别， 发出荧光。每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子产生。荧光定量 PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数（Ct值）与病毒核 酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小。不同生产企业的产品会 依据自身产品的性能确定本产品的阳性推断值。检测流程： 检测程序需要经过五个步骤，取样、留样、保存、核酸提取、上机 检测。首先依据试剂盒说明书进行样本采集，样本类型包括咽拭子、 鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。由于 RNA 易降解， 因此，采集样本时使用无RNA酶的拭子和无RNA酶的储存管。获得 1 Word文档 患者样本后，需尽快进行检测，如无法马上检测需要进行低温封装， 并送到特地的检测机构进行检测。检测机构收到样本后，对样本进行 核酸提取，核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试 剂盒。最终是荧光PCR核酸检测，也就是上机器检测，将提取物进行 荧光PCR扩增反应，需要7080分钟。 目前临床中常用的抗体血清学检测方法有3种：酶联免疫吸附试验法、 化学发光免疫分析法、胶体金免疫层析法。 酶联免疫吸附法（ELISA） ELISA 是一种结合抗原、抗体特异性反应和酶对底物高效催化作用 的高敏感性免疫学试验技术。测定时，受检的标本与固相载体表面的 抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合 物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反 应结合在固相载体上。固相上的酶量与标本中的受检物质的量成比例。 加入酶反应底物后，底物被催化成有色产物，产物的量与标本中受检 物质的量直接相关。所以，可依据呈色的深浅进行半定量或定性分析。 该检测方法灵敏度较高，载体标准化难度较低，但检测速度慢、易污 染、步骤较为繁琐。在实际应用中，需要依据抗原抗体的特性设计不 同的检测法，目前有双抗体夹心法、免疫抑制法、竞争法、直接法间 接法等类型。 胶体金免疫层析法 2 Word文档 是以胶体金为示踪标志物，应用于抗原抗体检测的一种新型免疫标 记技术，氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成肯定大小的金颗 粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态， 故称胶体金。胶体金试纸，是将胶体金标记的生物大分子在PVC材质 的试纸固定，留加样孔，并设检测线和质量掌握线。在加样孔上加入 样品后，再滴加液体介质，试纸上进行层析。依据试纸上的免疫反应 发生结果，即胶体金位置是否有红色条带消失推断检测结果。 该方法无需特别处理标本，仅需一滴血即可在15 min 内通过肉眼观 看猎取检测结果，突破了现有检测技术对人员、场所的限制，缩短检 测时间，操作便利快速，在基层医疗单位及现场检测中广泛使用。目 前针对新型冠状病毒，已经报道的有两种胶体金试纸，一种是检测新 型冠状病毒的抗原-双抗体夹心法，另一种是检测患者血液里特异性 针对新型冠状病毒的 IgM 抗体-IgM 捕获法。在疫情爆发期，需要大 规模做阳性检测时，适合使用总抗检测，同时联卡操作也比较简洁， 只需要操作一次，而分开检测需要滴加两次样，用两次卡。化学发光 免疫分析法 化学发光免疫分析法是将高灵敏度的化学发光测定技术与高特异 性的免疫反应相结合，用于各种抗原、抗体、激素等检测。该法灵敏 度高于 ELISA，具有特异性强、线性范围宽、结果稳定、操作简化等 特点，广泛应用于临床标本的检测。但是该方法对设备、操作、使用 环境的要求比较高，使用时需要配套的化学发光仪器。