β-人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒的开发.pdfVIP

摘要 摘 要 人绒毛膜促性腺激素（hCG ）由α 和β 两个亚基通过离子键和疏水键结合 在一起，分子量大约为 39KD，由合体滋养层细胞分泌，为人体胎盘和黄体细 [1-4] 胞中产生的一种糖蛋白激素，对着床和胚胎营养有很大作用 。同时对于妇科 [5,6] 炎症、绒毛膜疾病有一定的辅助诊断价值 。本论文主要进行β-人绒毛膜促性 腺激素（β-HCG ）免疫检测系统 （化学发光法）的研发过程探讨及性能评估。 研究方法： 将郑州伊美诺公司制备的62 株β 位点抗体进行配对筛选,根据抗原抗体的 最优化反应原则，确定包被、样品稀释液、酶结合物和反应模式。并建立校准 品系统，试剂盒的线性范围、重复性、准确性、最低检测限、特异性及稳定性 指标。检测1302 例健康人血清，以测定值的99%为界限，通过SPSS 软件计算 参考区间。与两家医疗机构合作，进行不同病理人群考核，验证试剂盒的临床 准确性。 结果： 筛选出最优的 1 对抗体作为试剂盒开发的原材料，并确定了原材料的质量 标准及工艺及反应体系。包被：PH6.5, 0.2M PB, 0.5μg/mL ；酶结合物：PH7.5, 0.01M Tris-HCl, 50%小牛血清；样品稀释液：PH7.5, 0.01M TAPS, 3%牛血清白 蛋白；校准品：PH7.5, 0.01M PBS, 3%牛血清白蛋白，校准品溯源到国际参考品 77364 。反应体系：两步法，37℃温育60+30 分钟，洗涤5 次；底物A 、B 分别 加入50μL，5 分钟内测定。试剂盒可以使用的样本为血清。校准曲线的建立为 发光值取对数后，采用四参数拟合方式建立校准曲线。试剂盒的线性范围为 1.0～1000mIU/mL；分析内变异、分析间变异和批间变异均不超过 10%；测定 500mIU/mL 的LH 、500mIU/mL 的FSH 、500μIU/mL 的TSH，检测结果均不超 过 1.0mIU/mL；样本中添加 50mg/dL 的胆红素、150mg/dL 的血红蛋白和 6000mg/dL 的甘油三酯对测定结果的影响小于 10%；最低检测限测定值不超过 1.0 mIU/mL,回收率在0.85-1.15 之间。考查了整套试剂盒的加速稳定性、拆封稳 定性和实时稳定性，结果均符合要求。参考值设定为5.0 mIU/mL。临床研究： 在两家医疗机构（河南省人民医院和河南省中医学院第三附属医院）分别测定 I 万方数据 摘要 110 例和 236 例临床样本，结果显示河南省人民医院结果：考核试剂盒与对比 试剂盒的阳性符合率为 100%，阴性符合率为 100%，总符合率为 100%。河南 省中医学院第三附属医院结果：考核试剂盒与对比试剂盒的阳性符合率为 99.01%，阴性符合率为100%，总符合率为99.03%，两者无明显区别，两者检 测数值呈高度相关。 结论： 本论文评估了β-人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒（化学发光法）的最 低检测限、重复性、特异性、准确性、稳定性、建立了试剂盒的参考值、开展 了临床应用研究，与已上市的国际同类权威试剂盒平行比对，结果表明本试剂 盒临床符合率高、检测准确性好、性能指标达到国际同类厂家水平。 关键词:制备工艺研究 性能评价 临床研究 稳定性研究