第十三讲 分光光度.ppt

1)单光束分光光度计 2.分光光度计的基本类型 0.575 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 第二十六页，共五十四页，2022年，8月28日 2) 双光束分光光度计 * 双光束型可以消除光源强度变化的影响。 比值 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 光束分裂器 第二十七页，共五十四页，2022年，8月28日 多通道仪器（Multichannel Instruments） 光电二极管阵列(通常具有316个硅二极管) photodiode arrays (PDAs) 同时测量200～820nm范围内的整个光谱, 比单个检测器快316倍,信噪比增加3161/2 倍. * 3) 其他类型分光光度计 纤维光度计 将光度计放入样品中, 原位测量. 对环境和过程监测非常重要. 第二十八页，共五十四页，2022年，8月28日 7.4 显色反应及影响因素 要求： a. 选择性好 b. 灵敏度高 (ε>104) c. 产物的化学组成稳定 d. 化学性质稳定 e. 反应和产物有明显的颜色差别 (?l>60nm) 没有颜色的化合物，需要通过适当的反应定量生成有色化合物再测定－－ 显色反应 一、 显色反应 第二十九页，共五十四页，2022年，8月28日 二、 显色反应的影响因素（显色反应条件） a 溶液酸度（pH值及缓冲溶液） 影响显色剂的平衡浓度及颜色，改变Δl 影响待测离子的存在状态，防止沉淀 影响络合物组成 形式 pH λmax(nm) 形式 pH λmax(nm) H4L+ 1.2 462-465 Sn4+ 1.0 530 H3L 4.8-5.2 462,490 Ga3+ 5.0 550 H2L- 8.4-9.0 512 HL2- 11.4-12.0 532-538 pH对苯芴酮及其络合物的颜色影响 第三十页，共五十四页，2022年，8月28日 b 显色剂的用量 稍过量，处于平台区 c 显色反应时间 针对不同显色反应确定显示时间 显色反应快且稳定；显色反应快但不稳定； 显色反应慢，稳定需时间；显色反应慢但不稳定 d 显色反应温度 加热可加快反应速度，但易导致许多显色剂或产物分解 第三十一页，共五十四页，2022年，8月28日 e 溶剂 f 干扰离子 有机溶剂，提高灵敏度、显色反应速率 消除共存离子干扰的方法： 提高酸度，加入隐蔽剂，改变价态 选择合适参比 褪色空白(铬天菁S测Al，氟化铵褪色，消除锆、 镍、钴干扰) 选择适当波长 第三十二页，共五十四页，2022年，8月28日 （一）、无机显色剂 钼酸铵法(测 P、 Si、W)， 过氧化氢法(测V5＋、Ti4＋) （二）有机显色剂（主要使用） 1、O，O给电子螯合剂： 铬天菁S（CAS）、苯基荧光酮（ PF ） 2、O，N给电子螯合剂：偶氮胂III等 三、分光光度法常用的显色剂 第三十三页，共五十四页，2022年，8月28日 3、N，N给电子基团：邻二氮杂菲（测Fe）等 4、带含硫基团的螯合剂：双硫腙（测Cu、Pb、Zn、Cd、Hg等） 第三十四页，共五十四页，2022年，8月28日 7.5 光度分析法的设计 a 选择合适的入射光波长，无干扰时选择最大吸 收峰波长?max。 b 确定线性区间。 c 控制吸光度读数范围在0.2~ 0.8 之间。 d 选择适当的参比溶液进行测量。 第三十五页，共五十四页，2022年，8月28日 7.6 吸光光度法的误差 非单色光引起的偏移 物理化学因素：非均匀介质及化学反应 吸光度测量的误差 对朗伯-比尔定律的偏移 第三十六页，共五十四页，2022年，8月28日 一、非单色光引起的偏移 复合光由l1和l2组成，对于浓度不同的溶液a和b,引起的吸光度的偏差不一样，浓度大，复合光引起的误差大，故在高浓度时线性关系向下弯曲。 第三十七页，共五十四页，2022年，8月28日 非均匀介质 胶体，悬浮、乳浊等对光产生散射，使实测吸光度增加，导致线性关系上弯 二、物理化学因素 离解、缔合、异构等 如：Cr2O72-+H2O-=2HCrO4-=2H++2CrO