美罗培南方法学研究演示文稿.ppt

/ Laozhu的地盘，laozhu的讲稿 提 纲 美罗培南方法学研究演示文稿 当前第1页\共有26页\编于星期五\11点 （优选）美罗培南方法学研究 当前第2页\共有26页\编于星期五\11点 美罗培南(meropenem) 简介 美罗培南：非肠道的注射用抗生素 对阳性和阴性革兰氏病原体有抗菌作用； 加热时分解，得到开环物 。 Meropenem (300 mg) USP Retail Price: $189.00 当前第3页\共有26页\编于星期五\11点 美罗培南简介 条件试验 方法学 有关物质检查与含量测定 当前第4页\共有26页\编于星期五\11点 实验仪器及工作条件 1、仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪 50ul微量注射器 pH计，砂芯漏斗，针孔过滤器 2、试剂 乙腈（色谱专用） 三乙胺（A.R.） 浓磷酸（A.R.） 美罗培南试样 当前第5页\共有26页\编于星期五\11点 3、HPLC分析条件 色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C8 4.6×150mm,5μm(Agilent) 柱温：室温 流动相：0.3%三乙胺(用磷酸调节pH=5.0)的水溶液和乙腈(体积比100∶7)；也可以简化用纯水和乙腈(体积比100∶7)作流动相 检测器：DAD 检测波长：220nm 进样体积：20μl定量环，实际每次注射40μl 可不是件容易事啊！ 实验仪器及工作条件 当前第6页\共有26页\编于星期五\11点 美罗培南简介 条件试验 方法学 有关物质检查与含量测定 当前第7页\共有26页\编于星期五\11点 方法学研究 1、空白试验 2、美罗培南与BP及开环物的分离 3、美罗培南检测限、定量限 4、破坏性试验 5、溶液稳定性 6、工作曲线 7、样品的有关物质检测和含量测定 当前第8页\共有26页\编于星期五\11点 1、 空白试验 空针进样：基线是否稳定 流动相进样：是否有杂质影响 注意纵轴 当前第9页\共有26页\编于星期五\11点 色谱法中的信噪比 上：199nm N = 4 mAU 中：228nm N = 0.35 mAU 下：275nm N = 0.02 mAU DEP为例,典型UV吸收光谱 较小波长处： 信号和噪声均大 常识大 当前第10页\共有26页\编于星期五\11点 色谱法中的信噪比 199nm S = 58.8 mAU S/N = 14.7 228nm S = 18.3 mAU S/N = 52.3 275nm S = 2.18 mAU S/N = 109 1.5 mg/L 的DEP 当前第11页\共有26页\编于星期五\11点 使用缓冲溶液 不使用缓冲溶液 缓冲溶液对峰形的改善 原因分析： 当前第12页\共有26页\编于星期五\11点 2、美罗培南与BP及开环物的分离 美罗培南与中间产物BP分离 BP 美罗培南 BP 流动相改用50%乙腈：50%纯水 折腾好几天啊 当前第13页\共有26页\编于星期五\11点 美罗培南与BP光谱比较 多波长检测+ 化学计量学 当前第14页\共有26页\编于星期五\11点 美罗培南与开环物分离 计算分离度，理论塔板数 当前第15页\共有26页\编于星期五\11点 3、美罗培南测出限、测定限 测出限(LOD:S/N=3) 测定限(LOQ:S/N=10) LOD： 0.19 mg/L LOQ： 0.62 mg/ml 稀释多次 减少污染 当前第16页\共有26页\编于星期五\11点 4、破坏性试验(1) 25mg美罗培南，加0.1mol/L HCl 5ml，室温振摇溶解后反应液用0.1mol/L NaOH中和至中性进样 主峰84% 酸破坏 当前第17页\共有26页\编于星期五\11点 4、破坏性试验(2) 25mg美罗培南，加0.01mol/L NaOH 5ml，振摇溶解，室温放置34min后反应液用0.01mol/L HCl中和至中性进样。 主峰95.5% 碱破坏 当前第18页\共有26页\编于星期五\11点 4、破坏性试验(3) 25mg美罗培南，加1％双氧水1ml，振摇，室温放置14min，加热分解剩余的双氧水，加流动相至5ml过滤后进样。 主峰 83.33% 氧化破坏 当前第19页\共有26页\编于星期五\11点 / Laozhu的地盘，laozhu的讲稿 提 纲