高中生物课件：克隆技术复习.ppt

一、克隆的层次： 1、在分子水平上 2、在细胞水平上 3、在个体水平上 重组载体通过宿主细胞的无性繁殖使目的基因扩增，再用某探针选取、钓取目的基因。 单克隆抗体：利用动物细胞融合技术将骨髓瘤细胞和能产生抗体的B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞，再去培养，筛选到杂交瘤细胞系。 不通过两性细胞的结合，从一个单一的细胞繁殖出生物个体。即细胞 个体 ——基因克隆 ——细胞系的培养 ——繁殖出生物个体 第二章 克隆技术 目的基因在受体细胞内扩增 导入 扩增 DNA的复制 分子水平的克隆 （1）单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 细胞水平的克隆实例 化学性质单一、特异性强、灵敏度高的抗体。 特性： 聚乙二醇、灭活的仙台病毒 第一次筛选： 筛选出杂交瘤细胞 第二次筛选： 筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞 （2）动物细胞的培养过程 取动物胚胎 或幼龄动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 将动物体内的一部分组织取出 （可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞) （因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强） 单 个 细 胞 （接触抑制） 适宜的培养基培养 将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。 从机体取出后立即进行的细胞、组织培养，到培养的细胞形成生长晕并增大为止。 原代培养： 传代培养： 动物细胞培养的条件: 2.营养 1.无菌无毒的环境 3.适宜的温度和pH 4.气体环境 动物细胞培养的结果: — 细胞系或细胞株 动物细胞生长特点： （1）贴壁生长 （2）接触抑制 （3）细胞只分裂不分化 细胞系— （2）连续细胞系: （1）有限细胞系： 连续细胞株 有限细胞株 细胞株— 可传代的细胞 不能连续培养下去的细胞系 能连续培养下去的细胞系 大多数具有异倍体核型，有的是恶性细胞系，具有异体致瘤性，有的获得不死性（保留接触抑制，不致癌） 例：二倍体细胞 通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞 具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等。 （3）克隆培养法 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术 1、定义： 未经克隆的异质性细胞系 纯系： 克隆 经克隆以后的细胞的后裔细胞群，来源于一个共同的祖细胞。 2、产物: 遗传性状均一、表现的性状相似的细胞 3、细胞克隆的基本要求: 必须保证所建成的克隆来源于单个细胞 单细胞不如群体细胞 原代培养细胞和有限细胞系不如连续细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞 4、克隆对象的选择 依据： 选择对培养环境具有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞。 5、提高细胞克隆形成率的措施 选择适宜的培养基、添加血清、以滋养细胞支持生长、激素刺激、使用CO2培养箱调节PH 6、细胞克隆的用途 从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系 离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 胚状体 植物体 外植体 脱分化 再分化 植物组织培养过程 原理： 植物细胞的全能性 原因： 细胞核含该物种的全部遗传物质 细胞质丰富、液泡小而细胞核大，是未分化状态细胞 排列疏松，高度液泡化的薄壁细胞： 包裹人工种皮，形成人工种子 调节营养物质和生长调节剂的适当配比 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 正在融合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 去细胞壁 纤维素酶 果胶酶 物理方法 化学方法： 离心 振动 电刺激 聚乙二醇 细胞分裂 植物组织培养 植物细胞融合 酶解法 人工诱导方法 优点：克服远源杂交不亲和的障碍，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围。 植物体细胞杂交过程示意图 植物细胞培养(克隆)主要几种技术： 1、组织培养 2、悬浮细胞培养 3、原生质体培养 4、单倍体培养 通过调节营养物质和生长调节剂的适当配比，诱导愈伤组织生芽生根而形成再生新的植株。 通过液体悬浮培养使愈伤组织分散成单细胞，经适宜培养基中成分的诱导，可发育成胚状体，从而形成新株。 原生质体：去除细胞壁后的植物细胞。（细胞中由代谢活性的原生质部分，包括细胞核、质、膜） 用适当方法进行原生质体培养，也可以获得新植株。 用花药离体培养方法获得单倍体植株。 获得原生质体的方法：酶解法（纤维素酶和果胶酶水解细胞壁） 有些植物在多次继代培养后，会丧失细胞全能性的表达能力 可能原因：1.遗传物质发生不可逆转的改变