桑枝枯菌核病病菌拮抗芽孢杆菌的筛选和鉴定-《江苏农业科学》(2020年22期).docx

龙源版权所有 桑枝枯菌核病病菌拮抗芽孢杆菌的筛选和鉴定作者：宋文欣 陈清华 杨惠贞 蒙姣荣 李界秋来源：《江苏农业科学》2020年第22期 摘要：为获得有效防治桑枝枯菌核病的生防菌，通过对峙培养法筛选对桑枝枯菌核病病菌具有抑制作用的拮抗菌株，获得6株抑制作用较强的芽孢杆菌，其菌丝抑制率在65.41%～91.41%之间。叶片离体试验结果显示，6个菌株均能较好地抑制病斑的发展，其防治效果在50.00%～85.71%之间，均高于化学药剂对照40%嘧霉胺可湿性粉剂的防治效果（47.62%），其中以NN05菌株的防治效果最好，达85.71%。胞外酶活性检测结果显示，6个拮抗菌株均能产生胞外蛋白酶，均不能产生几丁质酶;除了NN05菌株外，其他5个菌株均具有溶磷作用;还有3株菌株（NN01、NN04和NN05）可以产生β-1，3-葡聚糖酶，3株菌株（NN05、NN11和NN29）可以产生纤维素酶。经16SrDNA序列和gyrB基因序列分析，将NN01、NN04、NN05菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillusvelezensis），NN11、NN25、NN29菌株鑒定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。本研究结果可以为桑枝枯菌核病的生物防治提供菌种资源。 关键词：桑枝枯菌核病;生物防治;胞外酶活性;贝莱斯芽孢杆菌;枯草芽孢杆菌;拮抗菌 中图分类号：S888.71+3文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2020）22-0106-05 作者简介：宋文欣（1995—），女，山东莒县人，硕士研究生，主要从事植物病理学研究。E-mail：1093441288@。 通信作者：李界秋，硕士，高级实验师，主要从事植物病害防治研究。E-mail：ljq@。 桑枝枯菌核病是春季桑园中常见的桑树真菌性病害，该病主要危害春季新萌发的桑芽及枝梢，在芽基部形成褐色病斑，皮层组织严重腐烂，导致桑枝折断，造成桑芽、新梢枯萎，严重发生时全田倒伏，春梢枯死[1-2]，遇上3月天气异常（特别偏冷或偏暖）年份，桑枝枯菌核病常常大面积暴发，造成桑叶年产量减少，严重影响桑蚕生产[2]。目前，对于桑枝枯菌核病的防治，主要强调种植抗病品种、清洁田园、及时清除病残枝，并加强桑园田间管理以培育健壮植株，必要的时候要进行化学防治[2-3]。然而，化学防治会对环境造成污染，且易造成家蚕中毒[2]。生物防治对环境污染小，能发挥持续的控制作用，具有安全、成本低的特点，是当前植物病害绿色防控的主要措施之一。芽孢杆菌（Bacillusspp.）是主要的植物病害生防菌种类[4]，针对桑树病害病原菌的芽孢杆菌类拮抗菌的筛选与鉴定已有一些相关的报道。王若琳等从健康桑树茎中分离获得内生贝莱斯芽孢杆菌（B.velezensis）NPJ13菌株，对桑断枝烂叶病菌（Boeremiaexigua）具显著的拮抗作用[5]。方翔等也从桑树健康植株中分离获得对肥大性桑葚菌核病菌（Solerotiniasclerotiorum）具有较强抑制作用的贝莱斯芽孢杆菌菌株[6-7]。谢洁等从桑树中分离到枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）菌株7PJ-16，对桑葚缩小性菌核病菌（S.shiraiana）有明显的抑制作用[8-9]。除此之外，国内外尚未有专门针对桑枝枯菌核病生物防治研究的相关报道。蛋白酶、几丁质酶、纤维素酶和β-1，3-葡聚糖酶等由拮抗菌分泌的胞外酶均与生防菌的防病及促生效果直接相关[4，10]。了解拮抗菌产生胞外酶的种类，可以对其抑菌机制及应用潜力作出初步的评价。 前期研究中，蒙朋从桑园土壤、桑根和桑枝上获得一批对桑树细菌性枯萎病病菌有抑制作用的芽孢杆菌菌株[11]，为探明这些菌株是否同时对桑枝枯菌核病病菌具有抑制作用，本研究选择其中10个菌株，采用对峙培养法测定其对桑枝枯菌核病病菌菌丝的抑制作用，同时进行离体接种初步评估其防治效果，用透明平板法对其产生胞外酶的种类进行初步检测，以期筛选出桑枝枯菌核病潜在的生防菌株，为桑枝枯菌核病的生物防治提供菌种资源，同时为研究拮抗菌的抑菌机制奠定基础。 1材料与方法 1.1试验材料 供试病原菌：桑枝枯菌核病病菌（S.sclerotiorum），由亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室（广西大学）分离并鉴定。 候选拮抗芽孢杆菌菌株来源：10株候选拮抗菌株为笔者所在实验室前期研究获得，其中NN04、NN05、NN25从桑根分离得到，NN01、NN09、NN12从桑茎分离得到，NN11、NN29、NN31、NN82从桑园土壤中分离得到[11]。试验用马铃薯葡萄糖（PDA）培养基、LB（Luria-Bertani）培养基、牛肉膏蛋白胨（NA）培养基及其培养液均按照常规方法配制。 40%嘧霉胺可湿性粉剂和枯草芽孢杆菌可湿