运动性骨骼肌损伤相关指标的实验研究-《首都体育学院学报》(2011年2期).docx

龙源版权所有 运动性骨骼肌损伤相关指标的实验研究作者：宋卫红 汤长发 梁小文 廖艳萍来源：《首都体育学院学报》2011年第02期 摘要：探讨血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)以及波形蛋白(Vimentin)与骨骼肌损伤的关系，将50只8周龄SD大鼠随机分为安静组(C)和运动组(B1，B2，B3，B4)，运动组进行重复3d的力竭性离心运动，电镜和光镜检测骨骼肌损伤病理生理变化，分光光度法检测大鼠血清CK、LDH的变化和免疫组化检测波形蛋白的表达。结果显示：1)血清CK、LDH出现时程变化，并与骨骼肌损伤出现了一致性；2)波形蛋白免疫反应分值呈现时程性。结论：1)CK可作为骨骼肌损伤的间接指标；2)波形蛋白的表达暗示着骨骼肌损伤后的再生。 关键词：运动性骨骼肌损伤；肌酸激酶；乳酸脱氢酶；波形蛋白；时程 中图分类号：G804.53　文章编号：1009-783X(2011)02-0184-04　文献标志码：A 在运动实践中，由于肌肉活检的限制，常用骨骼肌损伤的一些间接指标来反映肌细胞损伤程度，例如，血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶、肌红蛋白以及与炎症反应有关的蛋白(如急相蛋白)和炎症过程指标物等。近年来，结蛋白和波形蛋白的发现为肌肉病理研究开拓了一个新的领域，但是这些指标与运动性骨骼肌损伤的关系有不同的说法，本文通过对大鼠运动性骨骼肌损伤的直接测定和间接指标测定，从而探讨这些间接指标与骨骼肌损伤之间的关系。 1　材料与方法 1.1实验对象及分组 健康成年8周龄雄性(sprague-dawley，SD)大鼠50只，体重(212.55±15.74)g(购自湖南农业大学动物中心，许可证号：湘scxk 2003－003)，为清洁级实验动物。以国家标准啮齿类动物饲料分笼饲养，自由饮食和饮水。适应喂养3d后，进行一次5～10min跑台运动适应性训练(速度为16m／min，坡度为0°)。随机分成对照组(A)和运动后即刻(B1)、运动后3h(B2)、運动后24h(B3)和运动后48h组(B4)，每组10只大鼠。实验期间室温为20～25℃，相对湿度为45％～55％，自然昼夜节律变化光照。 1.2实验动物运动方案 运动组大鼠进行3d的运动跑台适应性训练(速度为16m／min，坡度为16°，时间为5～10min)后，休息2d，正式开始实验，力竭模型采用跑台运动，速度为16m／min，坡度为16°，持续运动至力竭。运动中采用声、光刺激或毛刷机械刺激鼠尾部，或中间适当休息2～4min，当动物出现卧位跑、反应迟钝，“逃避反应”极差，短时间休息后(低于10min)仍无法持续运动，则视为力竭。 1.3标本制备 实验运动方案结束后，用0.1％戊巴比妥钠1mL／100g腹腔注射进行麻醉。眼球取血1.5mL于离心管中，将血样离心(4℃，3000r／min，10min)分离血清，血清于－80℃低温冰箱贮存待测。迅速取右前肢肱三头肌内侧头下端肌腱和肌腹交界处取约1.0mm×1.0mm×0.2mm标本放入4℃预冷的生理盐水洗净血液，滤纸吸干肌肉组织表面水分，置于4％多聚甲醛溶液中固定24h，4℃冰箱保存，进行常规石蜡包埋。在每组10只动物中随机取1只右前肢肱三头肌内侧头下端0.5mm×0.5mm×0.2mm标本放入2.5％戊二醛中固定，以备透射电镜制备。 1.4指标测试 1.4.1透射电子显微镜观察骨骼肌损伤 透射电子显微镜主要观察骨骼肌组织的结构有：纵切面上肌原纤维、肌节排列的规则程度，A、I带完整情况和位置关系；肌膜、肌核、形态等。主要定量观察z线模糊、z线波纹状改变、Z线流!z线局灶性溶解、断裂和消失任一种情况者均称为z线异常，并统许Z线异常百分数。 1.4.2光镜下观察骨骼肌损伤 光镜主要观察骨骼肌组织的结构有肌外膜、肌核、肌纤维的形态及肌间质小血管、炎性细胞等，并统计细胞结构异常率。 1.4.3CK、LDH的测定 CK、LDH(试剂均产自南京建成)活性采用分光光度法测定。 1.4.4用免疫组织化学方法测定波形蛋白表达 免疫化学方法严格按试剂盒(美国SantaCruz公司)说明书操作，用麦克奥迪显微分析图像系统分析。每组选片4张，每张切片镜下(×400)随机取5个视野进行分析，阳性物质用光密度值和阳性表达面积表示，前者代表阳性区域波形蛋白的含量，即波形蛋白表达的程度，它的升高和降低反映了运动后不同的时间段各自表达程度的改变，从而间接反映骨骼肌微损伤和再生的变化情况，后者表示波形蛋白表达的范围，则比较直接地反映骨骼肌微损伤和再生的变化情况。 实验结果的分析以平均光密度值，阳性面积百分比和免疫反应···试读结束