菌落总数检验操作规程‌.docVIP

汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司 文件编码 第PAGE5页共NUMPAGES5页 菌落总数检验操作规程 颁发 部门 质量部 新订■修订□复审□ 页数 共2页 文件性质 管理标准■操作标准□ 技术标准□ 文件编码 原编编码 起 草 年 月 日 审核 年 月 日 批准 年 月 日 QC 年 月 日 执行日期 年 月 日 分发 部门 质量管理部、QC 目的 建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。 适用范围 适用于菌落总数的检验操作。 职责 检验人员 严格按检验操作规程进行检验。 QC主管 监督检查执行情况。 程序 1.范围 本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定 2.术语和定义 菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 3. 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。 3.3 恒温水浴箱：46 ℃ ±1 ℃。 3.4天平：感量为 0.1 g。 3.5均质器。 3.6振荡器。 3.7无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量 250 mL、500 mL。 3.9无菌培养皿：直径 90 mm。 3.10 pH计或 pH比色管或精密 pH试纸。 3.11放大镜或 和菌落计数器。 4.培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基：见附录 A 中 A.1。 4.2 磷酸盐缓冲液：见附录 A中 A.2 4.3 无菌生理盐水：见附录 A中 A.3。 5.检验程序 菌落总数的检验程序见图1。 检 样 检 样 25g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质 10倍系列稀释 10倍系列稀释 选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1 mL分别加入无菌培养皿内 选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液， 各取1 mL分别加入无菌培养皿内 每皿中加入15 mL～20 mL 每皿中加入15 mL～20 mL 平板计数琼脂培养基，混匀 培 养 培 养 计数各平板菌落数 计数各平板菌落数 计算菌落总数 计算菌落总数 报 报 告 图1 菌落总数的检验程序 6.操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液 6.1.3用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。 6.1.4 按 6.1.3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 6.1.5根据对样品污染状况的估计，选择 2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 6.1.6及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于 46℃ ±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 6.2培养 6.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃ ±1 ℃培养48 h±2 h。水产品 30℃±1 ℃培养 72 h±3 h。 6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 mL），凝固后翻转平板，按 6.2.1 条件进行培养。 6.3 菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming unit