第七章植物快速繁殖和脱毒1上课.ppt

变温处理的优点： 35℃使病毒钝化，31℃可提高小苗生活力，这样既提高脱毒率，又能提高成苗率。 热处理的局限性 （1）并非所有的病毒都对热处理敏感。热处理只对等径、线状的病毒和类菌质体起作用。 （2）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。 （3）热处理后只有一小部分植株能够存活。 第三节 快速繁殖中茎尖培养脱毒 1 病毒在植物体内的分布 2 无病毒苗的获得 2.1 材料的培养和灭菌 2.2 茎尖剥离 2.3 茎尖培养 2.4 提高脱毒效果 2.4.1 高温处理 2.4.2 低温处理 2.4.3 化学处理 2.4.2 低温处理，亦称冷疗法。 菊花植株在5℃条件下分别处理4个月或7.5个月，没有菊花矮化病毒（CSV）的无病毒苗分别是67%和73%，没有菊花褪绿斑驳病毒（CCMV）的无病毒苗分别是22%和49%，未经处理的茎尖则无脱毒效果。 2.4.3 化学处理，又称化学疗法。 一些化学药品如嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗生素处理，可在某种程度上抑制植物体内或离体叶片内病毒的合成，但仍不能使病毒失活。 三氮唑核苷用于防治一系列动物DNA和RNA病毒，对植物也有效。 表7-4 烟草外植体在三氮唑核苷条件下培养脱毒情况 供体中的病毒 三氮唑核苷浓度 (μmol/L) 子代植株数 无病毒植株/% PVY 马铃薯Y病 CMV 黄瓜花叶病毒 TMV 烟草花叶病毒 0 20.5 41.0 205.0 0 20.5 41.0 205.0 0 41.0 205.0 67 52 48 26 58 69 54 37 19 27 12 0 1.9 12.5 100.0 0 21.7 25.9 100.0 0 7.4 83.3 第七章 植物快速繁殖和脱毒 第一节 植物快速繁殖的途径和方法 第二节 继代培养 第三节 快速繁殖中茎尖培养脱毒 第四节 其他途径脱毒 第五节 脱毒苗的鉴定 第六节 脱毒后防病毒再感染 第四节 其他途径脱毒 1 愈伤组织脱毒 2 珠心胚培养脱毒 3 茎尖微体嫁接脱毒 4 培育抗病毒栽培种 1 愈伤组织脱毒 感染病毒的愈伤组织细胞并非全部含有病毒。 原因：可能因为细胞增殖速度快过病毒复制速度，或者细胞产生变异，获得对病毒感染的抗性，最终表现出脱毒现象。 缺陷：后代变异的几率大；有的愈伤组织不能分化成苗。 2 珠心胚培养脱毒 柑橘类多胚品种中除一个受精胚以外，尚有多个由珠心细胞形成的无性胚，称为珠心胚。 珠心胚与维管束系统无联系，因此由珠心胚产生的植株全部均无病毒。 珠心胚大多是不育的，必须分离培养才能发育成正常的幼苗。 珠心胚培养技术对除去柑橘主要病毒，如引起银屑病、叶脉突出病、柑橘裂皮病、柑橘速度病等的病毒，都十分有效。 3 茎尖微体嫁接脱毒 木本植物茎尖培养难以生根形成植株。 将实生苗砧木培育在培养基上，再从成年无病毒树枝上切取茎尖（0.14～1.0mm），在砧木切断面上进行试管微体嫁接，就可获得无病毒的幼苗。 4 培育抗病毒栽培种 烟草和黄花烟草的杂交种具有TMV抗性 马铃薯栽培种和野生种的杂种后代可抗PVY。 第七章 植物快速繁殖和脱毒 第一节 植物快速繁殖的途径和方法 第二节 继代培养 第三节 快速繁殖中茎尖培养脱毒 第四节 其他途径脱毒 第五节 脱毒苗的鉴定 第六节 脱毒后防病毒再感染 第五节 脱毒苗的鉴定 鉴定原因： 利用生长点培养无毒苗的成苗率和脱毒率非常低，有时无毒株只占千分之几。 许多病毒具有延迟的恢复期，所以在最初18个月中每隔一定时间仍需进行鉴定。 无病毒植株容易再被感染，因此在繁殖的不同时期仍需重复进行鉴定。 鉴定方法 1 直接测定法 2 指示植物法 3 抗血清鉴定法 4 电子显微镜检查法 1 直接测定法 直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状。 缺点：寄主植物感染病毒后需要较长的时间才出现症状，有的并不能使寄主植物出现可见症状，因此需要更敏感的测定方法。 2 指示植物法 利用病毒在其他植物上出现症状的特征，作为鉴别种类的标准。 这种专用以产生症状的寄主即为指示植物，又称鉴定寄主。 方法：接种时取待测植物的幼叶，加少量水及等量0.1mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0），磨成匀浆，吸取少量浆液揩抹在指示植物叶片上涂有500～600目金刚砂 ，轻轻磨擦使浆液能侵入叶片表皮细胞但又不损伤叶片。5分钟后用水冲洗叶面。 将被接种的指示植物置于有防蚜虫网罩的温室内，15～25℃，数天至几周后，指示植物即出现可见的症状。 表7-5 几种马铃薯病毒种类的症状 种 类 症 状 鉴定寄主 马铃薯X病毒，PVX 脉间花叶 千日红、曼陀罗、辣椒、番茄、心叶烟 马铃薯S病毒，PVS 叶脉深陷粗缩 苋色藜、千日红、光曼陀罗、昆诺阿藜 马铃薯