药物分析第十一章抗生素.pptx

药物分析第十一章抗生素;本法得优点:

灵敏、用量小,结果直观

适用范围广:纯度好得、差得制品,已知或新发现得抗生素均适用,同一类型得抗生素不需分离,可一次测定其总效价。

缺点:

操作步骤多,测定时间长,误差大等。;理化方法——适用于提纯得产品以及化学结构已确定得抗生素

优点:迅速、准确、有较高得专属性。

缺点:

对含有具同样官能团杂质得供试品不适用,或需采取适当方法加以校正。而且当该法就是利用某一类型抗生素得共同结构部分得反应时,所测得得结果,往往只能代表药物得总得含量,并不一定能代表抗生素得生物效价。;第二节β-内酰胺类抗生素;酸性:

青霉素和头孢菌素分子中得游离羧基具有相当强得酸性,大多数青霉素得pKa在2、5～2、8之间,能与无机碱或某些有机碱形成盐。

旋光性:

青霉素族分子中含有三个手性碳原子,头孢菌素族含有两个手性碳原子,故都具有旋光性。;β-内酰胺环得不稳定性:

β-内酰胺环就是该类抗生素得结构活性中心,其性质活泼,就是分子结构中最不稳定部分,其稳定性与含水量和纯度有很大关系。在酸、碱、青霉素酶、羟胺及某些金属离子(铜、铅、汞和银)或氧化剂等作用下,易发生水解和分子重排,导致β-内酰胺环得破坏而失去抗菌活性。

;二、鉴别试验

(一)呈色反应

羟肟酸铁反应青霉素及头孢菌素在碱性中与羟胺作用,β-内酰胺环破裂生成羟肟酸;在稀酸中与高铁离子呈色。

茚三酮反应(侧链含?-氨基酸结构)

与重氮苯磺酸得偶合反应(侧链含酚羟基)

硫酸-甲醛试验

;(二)各种盐得反应

钾、钠离子得火焰反应

有机胺盐得特殊反应(如普鲁卡因青霉素得重氮化-偶合反应)

(三)色谱法

高效液相色谱法(HPLC)

薄层色谱法(TLC)

中国药典收载得头孢菌素族药物和大多数青霉素族药物采用HPLC法进行鉴别。

;(四)光谱法

IR——各国药典对收载得β-内酰胺类抗生素几乎均采用了本法进行鉴别。

该类抗生素共有得特征峰:

?－内酰胺环羰基得伸缩振动(1750～1800)

仲酰胺得氨基、羰基得伸缩振动(3300cm-1±,1525cm-1±,1680cm-1±)

羧酸离子得伸缩振动(1600cm-1±、1410cm-1±)

UV——利用最大吸收波长鉴定法或利用水解产物得最大吸收波长鉴定法。;三、特殊杂质得检查

本类抗生素得特殊杂质主要有高分子聚合物,有关物质,异构体等,一般采用HPLC法控制其量,也有采用测定杂质得吸收度来控制杂质量得。;聚合物——HPLC法

聚合物得检查采用分子排阻色谱法。分子排阻色谱法得分离原理为凝胶色谱柱得分子筛机制。色谱柱多以亲水硅胶、凝胶或经修饰凝胶如葡聚糖凝胶(sephadex)和聚丙烯酰胺凝胶(sepharose)等为填充剂。

现以头孢她啶中头孢她啶聚合物得测定为例;12;色谱条件与系统适用性试验

用葡聚糖凝胶G-10(40～120?m)为填充剂,玻璃柱内径1、3～1、5cm,床体积50～60mL;

流动相A为含3、5%硫酸铵得0、01mol/L磷酸盐缓冲液(pH值7、0),流动相B为0、01%十二烷基硫酸钠溶液;流速为每分钟1mL;

检测波长为254nm。

以流动相A为流动相,用1mg/mL蓝色葡聚糖2000溶液进样200?L进行测定,理论板数应不低于900,拖尾因子在0、75～1、5,对照品溶液以流动相B为流动相,重复进样200?L,峰面积值得相对标准差应小于5、0%。;对照品溶液得制备:取头孢她啶对照品适量,精密称定,加水制成含头孢她啶100?g/1mL得溶液,摇匀。

测定法:取本品适量,精密称定,加水制成含头孢她啶20mg/1mL得溶液,立即进样200?L,以流动相A为流动相进行测定,记录色谱图;另取对照品溶液200?L注入液相色谱仪,以流动相B为流动相,记录色谱图,按外标法计算,本品含头孢她啶聚合物以头孢她啶计不得过0、3%。;自身对照外标法得原理:

该法就是利用特定条件下β-内酰胺类抗生素可以缔合成与高分子杂质有相似色谱行为得缔合物,即在Kav=0处表现为单一得色谱峰。

以药物自身为对照品,测定其在特定条件下缔合时得峰响应指标;

然后改变色谱条件,测定样品,记录样品色谱图中Kav=0处得高分子杂质峰得响应指标,

按外标法计算,即得样品中高分子杂质相当于药品本身得相对含量。;;有关物质和异构体

例1头孢呋辛酯中有关物质和异构体得检查:

色谱条件与系统适用性试验:要求头孢呋辛酯A,B异构体之间、头孢呋辛酯A异构体与头孢呋辛酯△3-异构体之间得分离度R﹥1、5。

头孢呋辛酯A,B异构体、△3-异构体及E异构体峰得相对保留时间分别约为1、0、0、9、1、2及1、7和2、1。

异构体——供试品色谱图中A异构体峰得面积与A、B异构体峰得面积和之比应为0、48～0、