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hplc法测定红枣提取物中花青素的成分 花青素是黑莓中的主要黄酮类物质。这是一种广泛存在于自然界植物中的可溶性天然颜色。在自然状态下，各种单体糖都会形成五颜六色的颜色胺。花青素作为一种天然食用色素,安全、无毒、资源丰富,而且具有一定营养和药理作用,在食品、化妆品、医药、保健等方面有着巨大的应用潜力。大量研究表明,花青素具有抗氧化、抗突变、预防心脑血管疾病、保护肝脏、抑制肿瘤细胞发生等多种生理功能。笔者采用高效液相色谱法对黑米中花青素的主要成分进行了分析,为准确鉴定黑米提取物中花青素的成分和含量提供一种有效的检测方法。 1 材料和方法 1.1 材料和设备 1.1.1 求解熔糖苷siga标准品 黑米(吉林地产,市售),矢车菊素-3-葡萄糖苷标准品(Sigma公司);甲醇、乙腈(色谱纯 Fisher Scientific )、盐酸、磷酸、无水乙醇(分析纯)。 1.1.2 仪器、检测和仪器 LC-20AT高效液相色谱仪(岛津);检测器 SPD-20,VP-ODS C18柱(4.6 mm×150.0 mm),UV-1700分光光度计(岛津),电子天平,超纯水仪,真空泵,超声清洗器。 1.2 实验方法 1.2.1 乙醇浸泡液制备法 将1.5 t黑米倒入浸泡池中,用35%～45%乙醇浸泡4 h,温度控制在30～40 ℃,将浸泡液进行分离除杂后,用减压蒸馏的方法去除多余的乙醇,干燥成粉末。 1.2.2 紫外-可见吸收光谱vvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvv 用移液管吸取花青素样品溶液0.2 ml,移入10.00 ml的容量瓶中,用1%盐酸甲醇(V∶V)稀释,用UV-1700进行紫外-可见吸收光谱分析。 1.2.3 盐酸甲醇溶液的制备 准确称取25.00 mg的黑米提取物溶于25.00 ml的1%盐酸甲醇溶液中,超声20 min,将溶液用0.22 μm滤膜过滤,取5 μl上样。 1.2.4 标准储备液配制 将矢车菊素标准品1.00 mg溶于1.00 ml 1%盐酸甲醇溶液中,配成1 mg/ml的标准储备液。从标准储备液中吸取一定量,用1%盐酸甲醇稀释成2、10、20、50、100 μg/ml标品待测液,用0.22 μm滤膜过滤,取5 μl上样。以矢车菊色素浓度为纵坐标,峰面积为横坐标进行线性回归分析,绘制标准品的标准曲线:f(X)=1.864 960×10-5X-0.329 793,r=0.999 9。 1.2.5 材料含量测定 x(%)=A?C?VAs?m?10006?fx(%)=A?C?VAs?m?10006?f 式中,x为矢车菊色素含量;A为样品中矢车菊色素峰面积;C为标准溶液中矢车菊色素的浓度(μg/ml);V为样品最终定容体积(ml);As为标准溶液中矢车菊色素峰面积;m为试样质量(g);f为稀释倍数。 1.2.6 ph值的调ph值,用naoh调ph值 流动相:4%磷酸∶乙腈(8.8∶1.2,V∶V,用NaOH调pH值为2.0),0.45 μm滤膜抽滤,等梯度洗脱,流速 0.8 ml/min;柱温30 ℃;检测波长520 nm。 2 结果与分析 2.1 特征吸收蜂特征 花青苷类化合物分别在265～275和465～560 nm处有2个特征吸收蜂。将黑米提取物用1%盐酸甲醇溶解,进行紫外-可见光吸收光谱扫描,可以发现在紫外和可见光区各有1个较强的吸收峰,其波长分别为270和520 nm,由此可推断黑米提取物中的色素为花青苷类物质。 2.2 矢车菊素-3-葡萄糖的标准色度图 由图1可知,矢车菊色素保留时间为13.551 min。 2.3 保留时间检测 图2为在图1的实验条件下测定黑米提取物4个批次产品得到的色谱图。从色谱图上可以看出,在13.551 min附近均有峰检出,4个批次的保留时间分别为13.722、13.633、13.517、13.518 min,平均保留时间为13.598 min,与标品的保留时间比较吻合,可以断定此峰为矢车菊素。将图2中矢车菊色素的峰面积代入标准曲线,通过计算得出黑米提取物中矢车菊色素的平均含量为41.8%。 2.4 日本效果的回收率 分别精密吸取一定量的矢车菊素-3-葡萄糖苷标准品溶液,加入到已知量的矢车菊素-3-葡萄糖苷浓度的样品中,按测定样品含