萝卜下胚轴高效再生体系的建立-《江苏农业科学》(2014年1期).docx

龙源版权所有 萝卜下胚轴高效再生体系的建立作者：李媛媛　王冰林　韩佳　郑慧敏　何珊　胡玉荣　张军来源：《江苏农业科学》2014年第01期 摘要：以7个萝卜品种为试材，开展下胚轴离体培养研究，通过基因型筛选确定具有较高再生频率的萝卜品种进行后续试验，探讨AgNO3浓度、激素配比、琼脂浓度等因素对萝卜下胚轴再生的影响。结果表明：萝卜下胚轴再生的最适培养基为改良MS+1.8 mg/L 6-BA+0.8 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3+0.9%琼脂+30 g/L 蔗糖，不定芽再生率高达78.3%，玻璃化率仅为2.8%。 关键词：萝卜；下胚轴；离体再生；AgNO3；激素配比 中图分类号： S631.104.3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0058-03 收稿日期：2013-05-16 基金项目：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金（编号：2007BS06024）；山东省农业良种工程重大课题。 作者简介：李媛媛（1979—），女，山东桓台人，博士，讲师，从事蔬菜遗传育种研究。Tel：（0536）8785690；E-mail：yylilove@126.com。 通信作者：王冰林，博士，副研究员，从事蔬菜遗传育种与栽培生理研究。Tel：（0536）2118661；E-mail：binglinwang@126.com。萝卜是一种重要的营养保健蔬菜，在我国蔬菜栽培和供应中占有重要地位，近几年种植面积不断扩大，产量也在逐步提高，目前全国萝卜栽培面积约为120万hm2/年，总产量达 2 683万t/年[1]。萝卜生产以应用杂交种为主，自交不亲和系和雄性不育系利用是萝卜杂交育种的重要途径，而其传统的保存方法局限性较大。随着生物技术的快速发展，组织培养成为保存和快繁自交不亲和系和雄性不育系的有效途径，同时也是利用基因工程技术选育优良品种的重要前提。萝卜为再生頑拗型植物，再生频率普遍较低[2]，所以建立高效、实用的离体再生体系和组培快繁体系成为萝卜生物技术育种的关键限制因素。因此，笔者选用7个萝卜品种，从基因型、激素配比、AgNO3浓度、琼脂浓度等方面对萝卜下胚轴再生的影响进行了研究，旨在建立高效的萝卜离体再生体系，为利用生物技术与常规育种方法相结合开展萝卜遗传育种和良种繁育提供技术支撑。 1材料与方法 1.1试验材料 供试7个萝卜品种由山东省潍坊市农业科学院提供，分别为杂交种红光102、白玉冠军、潍萝卜1号、潍萝卜2号、潍萝卜3号，常规种潍县萝卜、改良潍县萝卜。 1.2试验方法 1.2.1无菌苗培养挑选颗粒饱满的萝卜种子，用蒸馏水清洗干净后用滤纸吸干。在超净工作台上用70%乙醇处理 30 s，再用0.1%氯化汞处理8 min，无菌水冲洗4～5遍，然后接种于1/2MS培养基（含20 g/L 蔗糖+7.5 g/L 琼脂，pH值 5.8～6.0）上。每个三角瓶接种5～10粒种子，置于25 ℃、光照时间16 h/d、光照强度2 000 lx条件下培养，获得无菌苗。 1.2.2不定芽诱导切取生长4～5 d的无菌苗下胚轴（切段长5～10 mm），接种于改良培养基（MS+5 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L NAA+7.5 g/L 琼脂+30 g/L 蔗糖）上，每瓶接种 4～5个外植体。在温度25 ℃、光照时间16 h/d、光照强度 2 000 lx 条件下培养15～20 d，统计不定芽再生率及玻璃化率，选出再生频率较高的萝卜基因型。以再生情况最好的基因型为材料，筛选合适的激素（6-BA和NAA）浓度配比、AgNO3 浓度和琼脂浓度。愈伤再生率=（形成愈伤的外植体数/接种的外植体总数）×100%；愈伤褐化率=（褐化的愈伤数/愈伤总数）×100%；不定芽再生率=（形成再生芽的外植体数/接种的外植体总数）×100%；玻璃化率=（玻璃化芽数/芽总数）×100%。 1.2.3不定根诱导外植体培养15～20 d后，愈伤组织基本脱分化出不定芽，将不定芽切割成小块，接于1/2MS基本培养基上诱导生根。 2结果与分析 2.1不同基因型对萝···试读结束