微生物学实验六霉菌的形态观察.pdf

实验六 霉菌的形态观察 13 生物基地 201300140059 刘洋 2014-11-13 同组者：吕赞 刘沛余 马华峥 一、 实验器材 1. 菌种 青霉、毛霉、黑根霉、黑曲霉 48h 马铃薯琼脂斜面培养物 2. 溶液和试剂 75%乙醇、20%甘油 3. 仪器和其他用品 酒精灯，载玻片，盖玻片，载玻片夹子，镊子，显微镜，接种环，U 形玻棒，平皿， 试管，烧杯，滴管，无菌水等 4. 培养基 马铃薯琼脂培养基（简称 PDA，配方见附录） 二、 实验目的 1. 学习并掌握霉菌的形态观察方法和小室培养法。 2. 了解四种常见霉菌的基本形态。 3. 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。 三、 实验原理 1.霉菌概述 霉菌的营养体是分枝的丝状体。其个体比细菌和放线菌大得多，分为基内菌丝和气 生菌丝。气生菌丝生长到一定阶段又可分化出繁殖菌丝。不同霉菌的繁殖菌丝可以形成 不同的孢子。霉菌菌丝体 （尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的 重要依据。 2.霉菌的观察 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多 （约为 3-10 μm）,常是细菌菌 体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。 霉菌的观察可以采取直接制片法、透明胶带法和载玻片培养法（小室培养法）观察。 霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉 蓝染色液，用此染液做霉菌制片的特点是细胞不变形，具有杀菌、防腐作用，不易干燥， 能保持较长时间，能防止孢子四处飞散，棉兰具有一定的染色作用，染液的蓝色能增大 反差。 本次实验采用载玻片培养法。 3.载玻片培养法（小室培养法） 通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体 在盖玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌 自然 生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。 四、 实验步骤 1. 培养小室及灭菌：在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，在其上面放一个 U 型玻棒，在 U 型玻棒上放一块载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，于 121℃灭菌 30min， 烘干备用（如图）。 2 2. 琼脂块制备：通过无菌操作，用解剖刀由马铃薯琼脂薄层平板上切下 1cm 左右的 琼脂块，将其移至培养小室的载玻片上，每片两块。 3. 接种：通过无菌操作，用接种针从目标霉菌的马铃薯琼脂斜面培养物中挑取很少量 孢子，接种于培养小室中琼脂块边缘上，将盖玻片覆盖在琼脂块上，每个菌接种两 个平皿。 4. 培养：通过无菌操作，在培养小室中圆滤纸片上加 3-5mL 灭菌的 20%甘油（用于保 持湿度），盖上皿盖，28℃培养三天。 5. 镜检：根据需要于不同时间取出载玻片用低倍镜和高倍镜镜检（不用油镜）。 五、 注意事项 1. 若采用直接制片观察法，用镊子取菌和用解剖针分散菌丝时要细心，尽量减少菌丝 断裂及形态被破坏，盖盖玻片时避免气泡产生。 2. 在载玻片培养观察中，注意无菌操作，接种量要少并尽可能将分散孢子接种在琼脂 边缘，避免培养后菌丝过于密集影响观察。 六、 实验结果 各菌种典型形态特征表 菌种 形态特征 青霉 菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成 膨大的顶囊，其经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称 为帚状体。小梗顶端有孢子。 曲霉 营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部