第七章病毒分离鉴定.pptVIP

（2）血凝作用 血凝试验 血凝抑制试验 有血凝素（HA）的病毒能凝集人或动物红细胞，称为血凝现象，血凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验，原理是相应抗体与病毒结合后，阻止病毒表面HA与红细胞结合. 现在是31页\一共有49页\编辑于星期四 四、 电子显微镜检查 病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液，或者接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微镜检查，直接观察病毒粒子。 现在是32页\一共有49页\编辑于星期四 透射电子显微镜 现在是33页\一共有49页\编辑于星期四 1. 正染法：超薄切片法 取材 固定 戊二醛 四氧化锇 清洗与脱水 浸透 包埋 聚合 切片 染色 铀染 铅染 现在是34页\一共有49页\编辑于星期四 鸡痘病毒（超薄切片） 现在是35页\一共有49页\编辑于星期四 病毒材料采集与检验结果的关系 采取标本的时期 检查病毒及其成分 测定抗体 潜伏期及前驱期 刚发病或急性期 恢复期及康复期 较难查见 最多查见 很难查见 未增多 未增多或增多不明显 明显增多 （常超过4倍） 现在是1页\一共有49页\编辑于星期四 一、标本的处理 （一）除菌处理 粪便可加青链霉素使最终浓度为10000单位/毫升，置4℃过夜。 鼻咽拭子一般加抗生素最终浓度为2000单位/毫升，置4℃作用4小时。 对乙醚有抵抗的病毒如鼻病毒、肠道病毒、呼肠孤病毒、腺病毒、痘病毒等，则可加入等量的乙醚4℃过夜除菌。 现在是2页\一共有49页\编辑于星期四 （二）研磨和稀释 对脑、脊髓等组织标本首先应经研磨器或乳钵中充分研磨后，加稀释液（pH7.6肉汤或10％脱脂牛乳生理盐水或0.5％水解乳蛋白Hanks液）制成组织悬液，然后经2000转／分离心20分钟。必要时可加抗生素处理（同上）。 现在是3页\一共有49页\编辑于星期四 病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。 二、病毒的分离培养 ? 现在是4页\一共有49页\编辑于星期四 (一）动物接种法 接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。 按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。 现在是5页\一共有49页\编辑于星期四 动物接种的优缺点： 优点：（1）不需要复杂的仪器设备； （2）技术简单； （3）易成功 缺点：（1）个体差异大 （2）价格昂贵 （3）数量有限 （4）需要隔离畜舍 现在是6页\一共有49页\编辑于星期四 （二）鸡胚接种 1. 鸡卵的选择 一般都选新鲜、10天以内的受精卵以保证规格质量上的一致 。 2. 孵育 孵育时可将鸡卵放入卵箱内进行,气室向上，孵育的最适温度为38--39℃，相对湿度为40—70％，孵育8日后，鸡卵应每天翻动1—2次，以帮助鸡胚发育匀称和防止鸡胚膜粘连。 现在是7页\一共有49页\编辑于星期四 3. 检卵 鸡卵孵育4～5天后，即可用检卵器检查鸡胚发育情况（二天一次）。 （1）未受精鸡卵：在检卵器上仅见到模糊的阴影。 （2）活鸡卵：鸡胚发育4天后，在检卵器上就可见到清晰的血管，鸡卵内有一小黑点（鸡胚），有明显的自然转动。 现在是8页\一共有49页\编辑于星期四 （3）死胎：如果发现鸡卵血管模糊、扩张、胚胎活动呆滞或不能自主地转动，则可判断胚胎频死或已经死亡，应将其挑捡出来。 鸡胚孵育完毕后，用铅笔划出气室边缘和胚胎的位置待用。 现在是9页\一共有49页\编辑于星期四 鸡胚羊膜腔接种：用12～14天鸡胚，将检材注入羊膜腔，孵育后取羊水检查（图7-8）。常用于流感病毒的初次分离。 鸡胚卵黄囊接种：用5～8天鸡胚，以细长针头由鸡卵气室端刺入卵黄囊。孵育后取获卵黄囊膜检查（图7-7）。常用于某些嗜神经病毒的分离。 4.接种 现在是10页\一共有49页\编辑于星期四 绒毛尿囊膜接种：用10～l 2天鸡胚，以无菌手续在蛋壳上开—小窗，然后将材料滴在绒毛尿囊膜上．孵育后。观察膜上有无斑点病变(图7-10)。常用于培养单纯疱疹病毒、天花病毒和痘病毒。 尿囊腔接种 用9～12天鸡胚，将标本接种于尿囊腔, 孵育后取尿囊液检查(图7-9), 常用于培养流感病毒和腮腺炎病毒等。 现在是11页\一共有49页\编辑于星期四 5.剖检及收获 收获前鸡胚应置4℃冰箱过夜，使鸡胚内血液凝固。收获时，用碘酒将气室部卵壳消毒，将气室处卵壳剥去（不