结直肠癌分子标志物临床检测中国专家共识.pptx

结直肠癌分子标志物临床监测中国专家共识 前言结直肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，全球发病率居恶性肿瘤第3位，死亡率居第2位。在我国，结直肠癌发病率亦呈现逐年上升趋势。根据2019年国家癌症中心数据显示，2015年中国结直肠癌新发病例38.8万，死亡病例18.7万[1]。结直肠癌的早期筛查及预防可以降低发病率、提高治愈率，相关分子标志物的检测是结直肠癌筛查的有效补充，同时对个体化方案的判定、预后判断及疗效预测等方面起到重要作用。本共识综合国内相关领域专家临床实践经验及国内外相关领域的研究成果，旨在为结直肠癌分子标志物的临床检测及临床实践提供规范及指导。 前言本共识对结直肠癌治疗中与方案选择和预后判断有关的分子标志物的检测标本、检测方法以及检测结果的解读提供了指导意见。其中每个分子标志物检测的适应证和时机见图1。 检测标本目前在临床中，用于结直肠癌分子标志物检测的标本来源主要为患者的肿瘤组织标本以及外周血标本，其中外周血标本又涵盖了外周血有核细胞、血液无细胞液体成分及循环肿瘤细胞（circulating tumor cell，CTC）。肿瘤组织检测可反映肿瘤的体细胞突变，而外周血标本中，血有核细胞的基因检测代表患者的胚系突变，CTC基因检测代表的是肿瘤的体细胞突变，而血液无细胞液体成分中的循环无细胞DNA（circulating free DNA，cfDNA）既可能源自肿瘤细胞，也可能源自血有核细胞[2]。 检测标本1．肿瘤组织标本：肿瘤组织标本中具有较富集的肿瘤细胞，可更真实地反映肿瘤中基因的变异情况，但由于无法区分突变是体细胞突变还是胚系突变，因此不能用于遗传性疾病如林奇综合征的诊断。肿瘤组织样本又可根据其来源分为原发灶样本和转移灶样本。对于结直肠癌相关KRAS、NRAS和BRAF基因的突变，在原发灶样本和转移灶样本中的一致性非常高。2．外周血标本：外周血有核细胞标本能明确反映胚系突变情况，可用于遗传性患者的诊断。但外周血有核细胞不能反映肿瘤组织的体细胞突变，无法帮助临床预测相关药物的治疗效果。外周血有核细胞标本基因检测时要注意CTC可能带来的干扰。 检测标本转移性结直肠癌（metastatic colorectal cancer，mCRC）既往的基因检测标准方法是组织活检，但存在若干缺点，包括人体侵入性、获得样本的技术难度较高等。近年来，微侵入性的液体活检技术显示出良好的应用前景。对外周血进行分离纯化后可以检测CTC或者cfDNA。cfDNA是指游离于血液中的细胞外DNA，主要来源于衰老、凋亡的血细胞和肿瘤细胞释放的片段化DNA，因此可以表达来自肿瘤的DNA。循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）是肿瘤细胞凋亡后进入血液的游离DNA，是cfDNA的一种，其监测或能更早地预测疾病复发[3,4]；为术前新辅助治疗及术后辅助治疗的疗效评估提供参考[5,6,7]。但目前尚缺乏特异性验证和可靠的重复试验。 检测标本目前，cfDNA的液体活检仍处于探索阶段，尚存在较多问题和挑战。外周血中ctDNA的含量较低，分离和纯化ctDNA具有一定难度，ctDNA在cfDNA中的占比较小，正常血细胞来源的DNA同样会对检测结果造成干扰。cfDNA在血液中的半衰期仅1.0~2.4 h，因此标本的取样、制备和存储等环节均有较高难度，极易造成结果不准确。此外，样本较易受到外部因素影响而不能正确反映患者肿瘤中的突变情况。因此，目前cfDNA液体活检仅推荐作为临床研究探索性应用。此外，CTC也是外周血标本中的重要部分。CTC是从原发或继发肿瘤脱落进入循环的肿瘤细胞。因循环中的肿瘤细胞分布相对稀少，CTC的检测过程主要分为两步，即细胞的分离富集和富集细胞的鉴定。目前，CTC及相关分子标志物检测的临床应用仍在探索中，可能对于疾病的早期筛查、预后判断和疗效评估有一定作用[4]。 检测方法目前，分子标志物的检测方法包括免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）、荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）和基因测序等。不同类型的标本和变异需要选择不同的检测方法。IHC操作简单，费用低，目前已在临床广泛使用。它主要用于检测蛋白的表达，但不能反映基因变异情况，目前只用于筛查。FISH在临床中广泛用于基因扩增、缺失及倒位异位的检测。基因测序方法中，Sanger测序法及荧光定量PCR费用适中，是临床检测中用于检测基因变异的传统技术，但只能检查一个基因特定范围内的突变，目前是在结直肠癌分子标志物检测中使用最多的检测方法。 检测方法第2代测序（next-generation sequencing，NGS）因其检测的高通量，一次检测可以包含几十个、上百个甚至整个基因组的变