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宫颈细胞DNA倍体分析检测宫颈病变的临床价值主要内容 50年来宫颈癌筛查虽然大大减少了发达国家和发达地区宫颈癌的发 病率与死亡率，而在发展中国家以及经济欠发达等卫生资源缺乏的地区, 宫颈癌的发病率与死亡率虽有所减低，但实际上仍比发达国家高许多。据 世界卫生组织统计的数据，2008年，在发展中国家，宫颈癌的新发病例 则位于第二位［28］。2012年，WHO估计世界范围内的宫颈癌新发病例为 52.8万，85%发生于经济欠发达地区，中国新增患者6.20万［10］。在这 些国家和地区，普遍存在着人口基数大、卫生资源缺乏、病理医生缺乏, 尤其是出色的细胞病理学医生，以及经济基础和实力不够的情况，这些情 况无疑放大了细胞学检查的不标准性、不确定性、不稳定性。由于病理医 师缺乏以及水平低下，一些地区甚至摒弃细胞学检查，而采用灵敏度较低 的宫颈醋酸白染色（VLI）以及宫颈卢戈氏碘染色（VILI）作为宫颈癌的初 筛［26,29］。近年来国内外已有报道细胞DNA倍体分析作为新的光电自动 检测法来行宫颈癌癌前评价［1 , 3~6］0宫颈脱落细胞DNA倍体分析较宫 颈细胞的TBS分类诊断用于宫颈癌筛查是否有更高或者相当的灵敏度，能 否在三阶梯筛查中取代TCT,实现宫颈癌筛查的自动化、智能化以及标准 化是本研究的目的。 .对象与方法研究对象 选取2013年2月至2013年10月在夷陵妇幼保健院妇科 门诊及住院接受宫颈癌筛查的942例患者，同时进行宫颈细胞DNA倍体 ③通过测量光密度（灰阶）计算被测细胞细胞核的积分光密度值（IOD, integrated optical density）o ④用 DNA 指数来表示 DNA 含量。DNA 指数二被测细胞DNA 10D值/正常细胞DNA 10D平均值。⑤由于淋巴细 胞内DNA含量及形态较为稳定，细胞DNA倍体分析时常用同一标本的 淋巴细胞作为标准对照。⑤分析每个细胞的DNA含量,并用DNA直方 图，散点图显示标本恶性度。按细胞DNA含量高低，由高到低自动排序， 将核酸含量高的前20个细胞核酸含量值直接报告，高于正常值为癌变细 胞。（如图5）。 7 6 4 3 1O 6 ? U 4? 7 3 7 6 4 3 1 O 6 ? U 4 ? 7 3 U 4 ， ， ， 7 细胞数量 均值1.972 标准差b 0.027 变化不赎：1.385 7,816- 6.753 14,/必14,4459 14.3-14.18, IVVIIVIVV 12345678910 DNA含量⑹正常＜5C 图5 :细胞DNA倍体分析报告图 宫颈细胞的恶变由胞核染色质首先改变，高危型HPV的DNA整合到 宫颈细胞核DNA上,病毒蛋白E6/E7分别通过与抑癌蛋白P53、RB相 作用，干扰中心体合成，纺锤丝缺陷，出现异倍体细胞核，最终才发展到 晚期癌变细胞。这是细胞DNA定量分析技术可用于宫颈癌筛查的理论依 据，也是全自动DNA图像分析系统在诊断CIN病变有可能较常规细胞学 敏感的理论基础。 1924年Feulgen和Rossenbcek发现了细胞核内DNA染色技术后 ［25］,使得这一理论转为实际应用。这一技术才得以开展、应用于实验室 及临床。早在2004年，The EuropeanSociety of the Analytical Cellular Pathology 就对 DNA 倍体分析适用 于辅助诊断宫颈病变达成共识［11］。近十多年,不断有DNA倍体分析技 术用于临床的报到［2,5,12-15,19］,在妇产科,多限于对宫颈癌及癌前病变 的DNA倍体分析［1,7,8,18,22］而用于宫颈癌普查贝报道的较少［3,6,21］。 本研究结果显示，随着细胞学检查结果级别的升高，DNA异倍体细 胞的比例也不断升高,与Nguyen VQ等［8］研究结果相似，同时，随着 DNA倍体分析级别的升高，病理诊断异常的可能也有逐渐提高的趋势。 此外，相对于单项筛查，宫颈细胞DNA倍体分析检测出CINU+病变的 敏感性要高于细胞学的TBS诊断(80% VS 57.6% )，两者的特异度差别不 大(54.7% VS 50.1% ) 0就筛查方案而言，DNA倍体分析诊断QNH + 病变优于单独细胞学TBS诊断以及两种的联合应用。 当然，宫颈细胞DNA倍体分析也有其不足之处［30］。目前宫颈癌的趋势之一腺癌的比例，而腺癌细胞比起鳞癌细胞，更容易重叠，聚集成团， 造成一定程度的分割困难，DNA图像分析系统极易将这类细胞视为垃圾 细胞，不能做出诊断，增加了误诊和漏诊率。此外，维生素B12缺乏、放 疗、化疗、HPV病毒感染等因素均可能影响DNA含量的测定，目前实际 所测得的数据并不能将这些影响因素加以区分。 虽然现已明确,高危型HPV感染是95%以上宫颈癌的明确