实验二、血涂片的制备和瑞士染色.pptxVIP

血涂片的制备和瑞氏染色 （复习）;血涂片的制备和瑞士染色;重点难点;将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。 瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，细胞的染色通过物理吸附作用，化学亲和作用，使细胞成分染成不同颜色。 ;碱性物质如：血红蛋白、嗜酸性颗粒染成红色； 酸性物质如：核染色质、嗜碱性颗粒、血小板等染成蓝色； 中性物质如: 中性颗粒及血小板颗粒染成紫红色； ;三、实验材料;1、取血标本1小滴（0.05ml），置载玻片一端1cm处或整片的3/4处的中央； 2、左手平执载玻片，右手持推片从血滴前方向后移动并接触血液，使血液沿推片呈线状散开； 3、推片与载玻片保持30-45°夹角，用均匀速向前将血液推成厚薄适宜的血涂片； 4、良好的血涂片要的要求：厚薄适宜、头体尾分明、细胞 分布均匀、两侧留有空隙，血膜边缘整齐。 5、干燥涂片 (1)空气干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。 (2)加热干燥：握住涂片，在距离酒精灯火焰上方50mm处 晃动，但不能直接对着火焰。 6、在载玻片的一端用记号笔编号，注明患者姓名(或门诊号/住院号)、日期； ;;1、血涂片干透后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢； 2、然后将玻片平置于染色架上，滴加染液(I液)3~5滴，使其迅速盖满血涂片，约0.5~1min后； 3、滴加等量或稍多的缓冲液(Ⅱ液)，轻轻播动玻片或用吸耳球对准血涂片吹气，使染液与缓冲液充分混匀，5~10min后用流水冲去染液，待干。;;;1、使用载玻片时，不要用手触摸载玻片表面，以保持载玻片的清洁、干燥、中性、无尘和无油腻； 2、皮肤采血法所获得血液和静脉抗凝血均可制备血涂片，后者使用前一定要充分混匀，以防止细胞沉积； 3、血涂片必须充分干燥，否则染色过程中可造成血膜脱落。 4、加染液应适量，过少易蒸发沉淀，不易冲洗。 5、冲洗时不能倾倒掉染液，应以流水冲洗，以防染料沉着在 血涂片上。 6、冲洗时间不宜过久，以防脱色。 7、冲洗完的血涂片应立放于支架上，剩余??分浸泡脱色。 ;类型 可能原因 不规则间断和尾部太长 推片速度不均匀、载玻片被污染 空泡 载玻片污染油脂 太长或太短 推片角度和速度不正确 无尾部 血滴太大 太短 血滴太小、推片速度太快 边缘无空隙 推片太宽 细胞退变现象 抗凝血放置时间过长，血膜固定延迟、 固定时间太短，固定剂甲醇被污染 白细胞破损 用力过猛 太厚 血滴大、血粘度高、推片角度大、推片速度快 ;;染色效果;白细胞分类计数;重点难点;白细胞分类计数是将血液制备成细胞分布均匀的薄膜血片，瑞氏染色后显微镜下根 据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。 ;三、实验材料;1.血涂片制备； 2.染色：将血涂片用瑞氏染液染色，冲洗干净，自然干燥后待用； 3.低倍镜观察： 观察全片，细胞分布和染色情况； 4.油镜观察： 选择血涂片体、尾交界处细胞分布均匀、着色良好的区域，滴加香柏