动物源食品中氯霉素类药物的测定 液相色谱-串联质谱法 GBT20756-2006教学PPT课件.pptVIP

动物源食品中氯霉素类药物的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T20756-2006 Page 2 一、氯霉素类药物的介绍 二、实验原理 三、检测步骤 四、LC-MS参数 五、技术要求及检出限 六、注意事项 主要内容 氯霉素又名氯胺苯醇，是由氯链丝菌产生的一种具有抑制细菌生长作用的广谱抗菌素，天然氯霉素是左旋体(也称左霉素)。合成品为白色或微黄色针状或片状晶体，无臭，味极苦，稍溶于水、乙醚和氯仿，易溶于甲醇、酒精、丙酮或乙酸乙酯，不溶于苯和石油醚。可用于治疗伤寒菌痢、尿道感染、百日咳、肺炎、败血症等疾病。 氟苯尼考 用途：动物专用抗菌药，用于敏感细菌所致的猪、鸡及鱼的细菌性疾病，尤其对呼吸系统感染和肠道感染疗效显著。 氯霉素类药物介绍 氯霉素结构中 芳香环上对位硝基是引起再生障碍性贫血的主要基团，氟苯尼考在结构上以H3C－SO2取代了O2N用药后不产生再生障碍性贫血的不良反应，因此在动物疾病防治上，尤其是食品动物，氟苯尼考将替代氯霉素，在兽医临床具有广阔应用前景 甲砜霉素为白色到类白色结晶性粉末或晶体，在二甲基甲酰胺中易溶，在无水乙醇中略溶，在水中微溶。临床上主要用于治疗呼吸、泌尿、肝胆、伤寒等肠道外科、妇产科和五官科感染等症，特别对中轻度感染作用尤其明显。 氯霉素类药物介绍 骨髓抑制：可逆性骨髓抑制是本药最严重的不良反应。此反应与用药剂量及疗程有关，常见于血药浓度超过25μg/ml的患者。临床表现为贫血，并可伴白细胞和血小板减少等。 再生障碍性贫血：用药后发生再生障碍性贫血者罕见。其临床表现有血小板减少引起的出血倾向，并发淤点、淤斑和鼻出血等，以及由粒细胞减少所致感染征象，如高热、咽痛、黄疸等。 灰婴综合征：尚未发现早产儿及新生儿有使用本药致“灰婴综合征”的报道，仅有出现短暂性皮肤和面色苍白的个案报道。 肝毒性：原有肝病者用药后可能引起黄疸、肝脂肪浸润、甚至急性重型肝炎。 不良反应 神经系统：长期用药后可出现周围神经炎和视神经炎，表现为听力减退、失眠、幻视、谵妄等神经系统症状，多属可逆性。也有长期用药后发生视神经萎缩而致盲的报道。 胃肠道反应：用药后出现食欲减退、恶心、呕吐、上腹不适和腹泻等胃肠道症状较为常见，其发生率约在10%以下 二重感染：长期用药后可使体内正常菌群减少，引起二重感染。 其他：(1)某些先天性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶不足的患者用药后可发生溶血性贫血；(2)长期口服给药，可能抑制肠道菌群而使维生素K合成受阻，诱发出血倾向。 2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，氯霉素在2A类致癌物清单中 不良反应 GB/T20756-2006实验原理 2.1 实验原理 试样中的氯霉素类药物，用乙酸乙酯提取。提取液旋转蒸干后，液相色谱仪—串联质谱仪测定，内标法定量。 3.1 试样制备 从样本中取具有代表性的1kg样品，均分为两份，装入洁净样品袋中，标记标明清楚，取其一份用组织捣碎机绞碎均匀。 3.2试样的保存 将试样于-18℃下保存。 检测步骤 3.3提取： 称取制备好的试样 2g（精确至0.01g）样品于50mL 离心管中，加入内、外标准工作液和15mL 乙酸乙酯，涡旋混合均匀，超声提取 30 min，11000 r/min 离心 10 min，取上清液于鸡心瓶中，下层再加入 15mL 乙酸乙酯，重复提取一次，合并两次清液，旋转蒸发至近干，残渣用1 mL 乙腈:水（1:9）复溶，加入10ml正己烷混合均匀，吸取下层澄清液体过0.22um有机相过滤头，上机LC-MS/MS测定。 检测步骤 3.4标准曲线的绘制 标准溶液配制的浓度为0.1ng/mL 、0.2 ng/mL、0.5ng/mL、1 ng/mL 、2 ng/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以定量离子峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标作图，得到标准曲线回归方程。 3.5空白试验 取空白试料，采用完全相同的测定步骤进行平行测定 检测步骤 Page 11 LC system Column Injection Volumn : Agilent 1290 RRLC : Agilent Zorbax Plus- C18, 2.1× 100mm, 3.5μm : 10 μL Temp : 30 ℃ Flow rate Mobile phase : 0.3 mL/min : A-0.5%的甲酸水含5mmoL/L乙酸铵 : B-Acetonitrile GB/T20756-2006的方法液相条件如下： LC-M