疟疾培训班.ppt

;疟疾全球分布;;;;疟疾血检对象“三热病人”临床诊断为疟疾疑似疟疾不明原因发热病非洲东南亚国家 等疟疾流行区入境人员和疟疾流行区回来发热人员为重点血检对象;一、疟疾实验室检测技术; 血涂片制作 1.所需设备 （1）载玻片：新载玻片应先浸入含洗涤剂的清水中10～20分钟，然后用干净棉毛巾逐片擦拭，再用清水冲洗干净，晒干，最后用干净柔软棉毛巾将玻片擦亮。最好将洗净的浸泡在 95%的酒精中5～10分钟，再将玻片擦干擦亮。 ; 洗净的玻片每10 ～20张用干净的白纸包好放入塑料袋内，保存于干燥环境中备有。 （2）采血针：使用一次性采血针。 （3）玻片盒：防污染、防苍蝇。 （4）75％酒精棉球： （5）记号笔：; 2.采血的部位和方法 以耳垂采血较为合适，也可在手指末端采血。先用75%酒精棉球消毒采血部位，待酒精干后，左手拇指和食指紧捏采血部位，右手持一次性采血针迅速刺入采血部位1～2mm深，然后用左手拇指和食指和右手中指协同挤出血滴。; 3.涂制血膜 取玻片2张，1张作载片，1张作推片用右手拇指和食指夹持推片侧缘中部。用推片的左下角刮取血液4 ～ 5μl，再用该端中部刮取血液1 ～ 1.5μl。将左下角的血滴涂于载片的中央偏右处，由里向外划圈涂成直径为0.8～1cm的圆形厚血膜。用干棉球抹净角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25 ～ 35角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜，薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳。薄血膜长度约2.5cm为佳.;; 4.厚、薄血膜的位置 目前推荐使用一张载玻片只有1个厚血膜，1个薄血膜。; 5. 染色前血膜的保存 血膜制成后，立即将受检者号码写在玻片上，血膜朝下插入直竖的标本盒内，让血膜自然干燥后才能染色。薄血膜在染色前须经甲醇固定，而厚血膜在染色前必须溶血，但新制作的厚血膜也可直接染色。血膜放置时间，夏天不宜超过48小时，冬天不宜超过72小时，否则厚血膜会自然固定而不能溶血，影响镜检。不能及时染色的血膜，可先用甲醇固定薄血膜，将厚血膜溶血，晾干后包好，放入干燥器中，置于冰箱内保存。临用时，将干燥器放置室温中1~2小时后取出血片。; (二) 血膜的染色 1. 染色液的制备 目前常用的血膜染剂有吉氏和瑞氏两种。吉氏染液染色效果稳定，染色时间和染液浓度对染色结果影响较小，染色后的血膜保存时间较长，同时吉氏染剂能长期保存而不变质，染色技术也易掌握，被推荐使用。瑞氏染色法因操作简便，常用于个别血片染色。; (1)吉氏染液： 吉氏粉 5g，甲醇250ml，甘油250ml。将吉氏粉置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至甘油加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研钵中加入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗后再倒入瓶中，至甲醇洗净研钵为止。塞紧瓶塞，充分摇匀，室温内放置，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使用。 ; (2)瑞氏染液 瑞氏染剂粉1g， 甲醇500ml， 甘油15ml。将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油充分研磨后，倒入有玻塞瓶中，再用甲醇洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。; 2. 染色用水 中性的蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水，pH7.0～7.2水效果最佳。可配制缓冲液用于染液的稀释和染色后的冲洗。配制pH6.6~7.4缓冲液时，先制备好两种贮备液。贮备液1为每1000ml蒸馏水含9.5g 磷酸氢二钠，贮备液Ⅱ为每1000ml蒸馏水含9.07g 磷酸二氢钾。配制pH6.6~7.4的缓冲液时，将两种贮备液按一定比例混合后，用蒸馏水稀释成各种浓度的溶液。 3. 染色方法 除瑞氏染色法外，染色前薄血膜要用甲醇或无水乙醇固定，厚血膜用蒸馏水或清水溶血。 ; (1)吉氏染色法 成批染色时，将血膜朝一个方向插入染色缸中，或背靠背插入染色缸中，倒入新配的2％吉氏染液(2ml吉氏原液同98ml蒸馏水或缓冲液混匀），浸没厚薄血膜，染色30分钟后，向染色缸中注入缓冲液或自来水，直到溢出，除掉染液表面上的浮渣，将染色缸中残余的染液倾出，加入新水，反复冲洗2~3次，取出玻片，将血膜朝下插在晾片板上干燥。 ; 单张血膜染色可取蒸馏水或缓冲液1ml加入吉氏染液1滴，混合均匀后，滴在厚、薄血膜上，染色2