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第三章 食用菌制种 第五节 菌种的分离、培养 * * 主讲：魏宗烽 一、分离菌种所需器具 1酒精灯：火焰灭菌用。 2解剖刀：1～2把，供切割组织块，剖开种木用。 3接种针：分离菌种时，批取孢子及菌丝。可用自行车钢条一端磨细弯成3毫米的小钩制成。 4镊子：尖嘴小镊子一把，20厘米长的大镊子一把，主要用于摄取种菇或其他物品。 5小榔头：敲打劈开种木时用。 6试管：数量根据实际需要而定，用于培养料 面菌种，试管口径以8一20厘米的较好。 7培养皿：放置食用菌的子实体、采集孢子或注入培养基进行板培养等用。 8漏斗：用于分装配好的培养基。 9搪瓷盘：用于盛种器皿和用具。 10三角瓶及烧杯：用于制备培养基。 11量筒或量杯：用于计量溶液的体积。 12铝锅及电炉：用于加热溶解琼脂等培养基原料。 13天平：用于称量培养基原料。 14棉花：用于制作瓶塞。少量脱脂棉花用于消毒。 15温度计：用于测量室内外温度和湿度。 16试管架、铁丝试管笼：用于排放试管及装盛试管培养基进行灭菌消毒等。 17培养容器：用于培养原种及栽培种。如玻璃瓶、塑料袋、塑料瓶。 18培养基灭菌设备：用于培养基的高温灭菌，常用高压锅，也可自制土蒸锅。 19电热烘箱：用于干燥法测定含水量，以及玻璃器具的干热消毒灭菌。 20恒温培养箱：用于恒温培养菌种。 21冰箱：在高温季节，用于保存某些菌种。 22生物显微镜：用于观察、鉴定菌丝及孢子的形态、构造。 二、 菌种的分离 食用菌菌种分离方法有四种，即组织分离法、孢子分离法、耳木分离法和土中菌丝分离法。（其中组织分离法、孢子分离法前面已介绍，这里略讲）。 （一）组织分离法 组织分离法是利用子实体内部组织来获得纯菌种的方法，根据不同的分离材料大体可分为三种。 1、子实体组织分离 2、菌核组织分离 茯苓、猪苓、雷丸等药用菌，常利用菌核分离得到菌种。分离方法是将菌核表面消毒后，用解剖刀切开，取中间组织1小块，接入PDA培养基上，20℃—25℃培养。 3、菌索分离 密环菌，假密环菌常用菌索来分离。方法是将菌索表面消毒后，去掉菌鞘，把白色菌髓部分用无菌剪刀剪成小段。移接在PDA培养基上，20℃—25℃培养，有白色菌丝长出且无污染，即表明分离成功。 （二）孢子分离法 1、种菇的选择 孢子分离用的形态不同，孢子分离的方法也不同。 ①整菇插种法：是将整只成熟度适当的种菇，经表面消毒后，插入孢子采集器内，放在适当的温度下，让其弹射孢子的方法。蘑菇、香菇、草菇等食用菌常用此法采集孢子。 ②钩悬法：将新鲜的成熟度适当的耳片用无菌水冲洗后悬挂在无菌的三角瓶内或有孔钟罩内，在一定温度下让其弹射孢子。木耳、银耳常用此法采收孢子。 *