一测多评法定量分析半夏及其混伪品中的4种核苷类成分.docx

? ? 一测多评法定量分析半夏及其混伪品中的4种核苷类成分 ? ? 王翠翠，毕启瑞，张建青，杨 琳，姚 帅，果德安* 一测多评法定量分析半夏及其混伪品中的4种核苷类成分 王翠翠1, 2，毕启瑞2，张建青2，杨 琳2，姚 帅2，果德安1, 2* 1. 南京中医药大学药学院，江苏 南京 210023 2. 中国科学院上海药物研究所，中药标准化技术国家工程研究中心，上海 201203 建立一测多评法测定半夏及其混伪品天南星、水半夏和虎掌南星中尿苷、腺嘌呤、鸟苷及腺苷的含量方法。利用高效液相色谱法，采用Shim-pack Scepter C18-120色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相10%乙腈-水，梯度洗脱；体积流量1 mL/min；检测波长260 nm；柱温20 ℃。以腺苷为内标，建立尿苷、腺嘌呤和鸟苷的相对校正因子，同时采用外标法和一测多评法测定多批次药材中4种成分的含量，验证一测多评法的准确性和可行性。尿苷、腺嘌呤、鸟苷及腺苷在各自线性范围内线性关系良好（＞0.999 9），平均加样回收率95.40%～104.02%，一测多评法和外标法测得的含量无显著差异（RSD＜3%），不同产地的半夏中4种核苷含量显示有明显差异。除天南星外，基于核苷的含量测定结果结合化学计量分析可以很好地区分半夏、水半夏和虎掌南星。该方法简便准确度高，可为半夏的质量控制和评价提供参考。 一测多评；半夏；天南星；水半夏；虎杖南星；混伪品；核苷；化学计量分析 半夏是天南星科植物半夏(Thunb.) Breit.的干燥块茎，有毒，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结等功效[1]。有报道表明核苷类成分为半夏降逆止呕的主要药效物质[2]，核苷类成分药理作用广泛，不仅是许多物质的代谢前体，而且在细胞生理学中也发挥多重作用[3]。现阶段半夏的检测与定量多集中于生物碱、有机酸和核苷类成分，关于半夏混伪品的含量测定报道较少，且上述含量测定多采用外标法[2,4-5]，鲜有一测多评法用于半夏中核苷类成分的测定。一测多评法（quantitative analysis of multi-components by a single marker ，QAMS）在被《中国药典》2010年版收录，并在美国药典和欧盟药典的中草药标准中得到广泛应用，大量文献研究报道了一测多评法的验证及其在中药分析和标准中的应用[6-9]。本实验采用高效液相色谱法，建立了一测多评法测定半夏、天南星、水半夏和虎掌南星中尿苷、腺嘌呤、鸟苷和腺苷4种核苷类成分的含量，为半夏的质量控制和评价提供了参考。 1 材料 1.1 仪器 Agilent 1260 Infinity II高效液相色谱仪（Agilent G7111B四元泵，Agilent G7129A进样器，Agilent G7115A DAD检测器）；P180H型超声波水浴锅（德国埃尔玛公司）；A-14型离心机（赛多利斯北京有限公司）；Secura 125-1CN型电子天平（赛多利斯北京有限公司）；Quintix 224-1CN型电子天平（赛多利斯北京有限公司）；Milli-Q Integral型超纯水系统（Millipore，Bedford公司，美国）。 1.2 试剂与药材 对照品尿苷（批号8041，质量分数97.2%）、腺嘌呤（批号5815，质量分数99.6%）、鸟苷（批号3877，质量分数≥98.0%）、腺苷（批号5747，质量分数99.3%）均购于上海诗丹德标准技术服务有限公司，半夏对照药材（批号121272-201806）购于中国食品药品检定研究院。乙腈（质谱级，Honeywell，批号UCCAIH），超纯水。 11批半夏、5批水半夏、5批虎掌南星、3批天南星均来源于市售及饮片生产厂家（表1），并经上海药物研究所中药标准化技术国家工程研究中心姚帅高级实验师鉴定为天南星科半夏属植物半夏(Thunb.) Breit.的干燥块茎，天南星为天南星科植物天南星(Wall.) Schott的干燥块茎，水半夏为天南星科犁头尖属植物鞭檐犁头尖(Lodd.) Blume.的干燥块茎，虎掌南星为天南星科植物虎掌Schott的干燥块茎。 表1 样品信息 Table 1 Information of samples 样品名称样品编号产地收集时间生产厂家 半夏湖北湖北2020-07伊春五加参药业有限责任公司 半夏河南1河南2020-07伊春五加参药业有限责任公司 半夏河南2河南2020-07伊春五加参药业有限责任公司 半夏河南3河南2020-07伊春五加参药业有限责任公司 半夏河南4河南2020-07伊春五加参药业有限责任公司 半夏山东1山东2020-07伊春五加参药业有限责任公司 半夏山东2山东2020-07伊春五加参药业有限责任公司 半夏山东3山东2