猪巴氏杆菌Lh-4株单因子发病模型的建立-《江苏农业科学》(2021年12期).docx

龙源版权所有 猪巴氏杆菌Lh-4株单因子发病模型的建立作者：华利忠 冯志新 李玉峰 袁厅 刘蓓蓓 张磊 邵国青来源：《江苏农业科学》2021年第12期 摘要：人工接种猪巴氏杆菌Lh-4株于SPF仔猪，以复制猪肺疫发病模型，并探讨其发生发展的规律，为今后研究该病的防治提供依据。选取5头30日龄SPF仔猪，随机分为攻毒组3头和对照组2头。联合采用滴鼻和皮下注射攻毒（109 CFU/头），攻毒后每天观察临床症状和测定直肠温度，并分别于0、4、10、16 d采集鼻拭子和抗凝血，进行细菌PCR检测。死亡和16 d时剖检，进行组织学观察，同时进行巴氏杆菌在各组织中的分布测定及细菌再分离，最后对具有类似临床症状的病原进行检测。结果发现，攻毒组有2头出现包括发烧、败血症、支气管肺炎、胸膜炎、心包炎等典型的猪肺疫临床症状和病理变化，1头出现了轻微临床症状。所有攻毒猪均能再分离到巴氏杆菌，其中典型发病猪各组织脏器中均有巴氏杆菌的分布，但轻微发病猪仅在心、肺、扁桃体和淋巴结中检测出。发病猪其他有类似临床症状的相关病原检测均为阴性。成功建立了猪肺疫发病模型，为巴氏杆菌病的发生发展规律，致病机制及其他巴氏杆菌临床分离株致病性的确定提供依据。 关键词：猪巴氏杆菌;猪肺疫;SPF猪;发病模型;病理变化 中图分类号： ：S858.28文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2021）12-0129-06 收稿日期：2020-09-01 基金项目：国家重点研发计划（编号：2017YFD0501600）。 作者简介：华利忠（1982—），男，江苏无锡人，博士，副研究员，从事猪病临床防控技术及实验动物研究。E-mail：steven828@126.com。 通信作者：邵国青，博士，研究员，主要从事动物传染病学研究。E-mail：gqshao@163.com。 多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）是存在于口腔、鼻咽及上呼吸道的条件致病菌 [1]。在猪中P. multocida主要引起急性死亡及波氏杆菌混合感染引起猪萎缩性鼻炎（atrophic rhinitis，AR） [2]。此外，P. multocida在猪呼吸道疾病综合征（porcine respiratory disease complex，PRDC）中也起著重要的作用 [3-4]。有报道显示，在中国发生肺炎和AR的病例中，P. multocida的检出率为8.0% [5]，而韩国检出率为15.6% [6]。在Kim等的另一个报道中显示，从2008年到2016年韩国巴氏杆菌的患病率更高达16.8%，且85%病例是与其他病原混合感染 [7]。可见P. multocida在猪病中的重要性。P. multocida具有很多血清型，多项流行病学调查均显示血清型A是我国最为流行的血清型之一 [8-9]，所以针对P. multocida血清型A的研究和防控显得尤为重要。由于P. multocida为条件致病菌，常为内源性感染，且通常表现为混合感染或由某些因素诱发，故临床上在预防给药的用药时间上把控难度较大。疫苗免疫是预防猪巴氏杆菌病的重要措施，但由于感染剂量的标准化难以确定，单因子动物发病模型往往出现全部急性死亡或不发病的情况，较难建立 [10]，其单因子发病的特点、病理变化以及排菌规律等的研究报道也很少，阻碍了疫苗研发的进程。本研究以SPF二元猪为基础试验动物，利用普遍流行的A血清型P. multocida强毒株Lh-4建立发病模型，并对发病的过程进行监测和各项指标的检测，探讨其单因子发病规律和特点。 1 材料与方法 1.1 试验动物及试验用菌株 试验用30日龄SPF长大二元猪5头，于2019年9月由江苏省农业科学院兽医研究所根据Huang等的方法 [11]经人工培育获得，经检测符合GB/T 22914—2008 SPF猪病原的控制与监测的国家标准。猪多杀性巴氏杆菌A血清型Lh-4株，由南京农业大学李玉峰教授惠赠。该菌株于2016年分离于江苏某规模化猪场猪肺疫急性病例，前期小鼠和仔猪攻毒试验证明为强毒株。 1.2 主要试剂和仪器 主要试剂：试验用核酸提取试剂盒购自爱思进生物技术有限公司;PCR试剂购自天根生物技术有限公司;非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司，其他在实验中所用试剂均为国产分析纯试剂。 主要仪器：组织切片机（德国Leica公司），PCR仪（美国PE公司），Kodak凝胶成像系统（美国Kodak公司），荧光定量PCR仪（美国ABI公司），BH-2光学显微镜（日本Olympus公司）。 1.3 试验设计及处理 试验用30日龄SPF猪5头，饲养于江苏省农业科学院实验动物房，于2019年10月随机分为2组，其中G