鸭瘟强毒人工感染雏鸭的显微和超微病理学变化-《江苏农业科学》(2017年16期).docx

龙源版权所有 鸭瘟强毒人工感染雏鸭的显微和超微病理学变化作者：刘忠伟　杨颖　江楠来源：《江苏农业科学》2017年第16期 摘要：为了解鸭瘟病毒（DPV）人工感染雏鸭后的组织器官病变规律、感染后病毒分布情况及细胞超微结构变化，试验以 DPV GZ 强毒株人工感染 90羽15 日龄健康雏鸭，分别在感染后 3、6、10、18、30、48、72、96、108 h 剖杀，采用PCR技术进行病原鉴定，并通过光学显微镜和透射电镜进行病理组织显微和超微结构观察。结果显示，人工感染 3 h 后即可通过PCR技术检测出DPV核酸；透射电镜观察表明感染后10 h可在脾脏中首先观察到少量的病毒，30 h 后胸腺开始发现病毒，病毒的数量随感染时间增加逐渐增加；感染18 h后，中枢免疫器官胸腺表现为淋巴细胞数量降低，组织间隙增大；脾脏组织病变严重，其余器官组织结构均出现程度较轻的组织损伤；感染后30 h，中枢免疫器官的淋巴细胞极度减少，器官组织结构模糊不清，出血较为严重；一些器官则出现细胞肿胀，肠道等器官组织也有细胞变性、出血等病理变化；在死亡鸭的肝脏、脾脏、十二指肠、胸腺发现数量极多的病毒。对照组鸭组织中未发现病理变化。这些研究结果可以为鸭瘟病毒的致病机制研究和鸭瘟的病理学诊断提供试验依据。 关键词：鸭瘟病毒；雏鸭；组织病理变化；超微结构变化 中图分类号： S8583253文献标志码： 文章编号：1002-1302（2017）16-0140-08 收稿日期：2016-07-02 基金项目：国家自然科学基金（编号31560703）；贵州省科学技术基金（编号：黔科合 J 字号[2009]2137 号）。 作者简介：刘忠伟（1980—），男，内蒙古锡林郭勒人，高级实验师，主要从事动物学研究。E-mail：zwliu @gzueducn。 通信作者：文明，博士，教授，主要从事兽医免疫学研究。E-mail：asmwen@gzueducn。 鸭瘟又称鸭病毒性肠炎，是由鸭瘟病毒（duck plague virus，DPV）引起的，多发于鸭、鹅和其他雁形目禽类的一种急性热性败血性传染病，其特征是血管损伤、体腔溢血、消化道出血坏死、淋巴器官受损和实质器官退行性变化等，是危害养鸭业最为严重的疾病之一。鸭瘟的流行没有明显的季节性，一年四季皆有发生，当鸭瘟傳入易感鸭群后，一般3～7 d开始出现零星病鸭，再经3～5 d陆续出现大批病鸭，进入流行发展期和流行盛期。鸭群整个流行过程一般为2～6周。如果鸭群中有免疫鸭或耐过鸭时，可延至2～3个月或更长。在试验条件下，DPV可通过口腔、鼻内、静脉、腹腔、肌肉和泄殖腔等途径传染；在形成病毒血症期间，吸血节肢动物也可传播本病。近年来研究发现，鸭瘟病毒与其他疱疹病毒相似，也可形成潜伏感染，在鸭等水禽的三叉神经节和淋巴组织包括外周血液中的淋巴细胞中可长期潜伏存在[1-5]。 本试验通过鸭瘟病毒强毒人工感染雏鸭，以PCR技术检测确认为鸭瘟感染后，利用光学显微镜和透射电镜进行病理组织显微和超微结构观察，以了解鸭瘟病毒人工感染后的组织器官病变规律、感染后病毒分布情况及细胞超微结构变化，为鸭瘟病毒的致病机制研究和鸭瘟的病理学诊断提供试验依据。 1材料与方法 11试验毒株 DEV GZ株，本实验室分离、鉴定和保存。 12试验动物 90羽15日龄雏鸭，购自贵阳市花溪区未接种鸭瘟病毒疫苗的养殖户。90羽雏鸭随机分成2组，第一组为人工感染组，72羽，腿部肌肉接种鸭瘟病毒GZ株病毒液01mL/羽；第二组为空白对照组，18羽，不进行任何处理，2组隔离饲养。分别在3、6、10、18、30、48、72、96、108 h剖杀雏鸭，观察临床症状，记录各器官病理变化及雏鸭的死亡情况。无菌采集脑、肝、脾、肾、十二指肠、胸腺、心、肺等组织样本（其中每个时段人工感染组剖杀8羽，空白对照剖杀2羽），编号并分别装于灭菌平板内和浸泡于固定液中。 13试验仪器 试验仪器包括超低温冰箱、常规解剖器械、PCR仪、凝胶成像仪、电泳仪、切片机、普通光学显微镜、透射电子显微镜等。 14试验方法 141利用PCR法检测病毒根据 GenBank 中登录的鸭瘟病毒基因序列，用Prime 50软件设计了1对特异性引物，上游引物为5′-ATGGCTATGGACCAACCG-3′，下游引物为5′-CATTCTCGCTCCGACACG-3′，扩增产物约923 bp，由上海生工生物工程有限公司合成。采用动物组织基因组DNA提取试剂盒（上海生工）提取DNA作为 PCR模板，按常规PCR方法进行鉴定。 142光学显微镜观察浸泡于固定液的组织水洗过夜，乙醇梯度脱水，透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色，光学显微镜下观察并拍摄和记录下各组织的病理变化。 143