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第 19 卷第 1 期 青 岛大 学学报 工程 技术版 Vol . 19 No . 1
2 0 0 4 年 3 月 JOURNAL OF QINGDAO UNIVERSITY ( E T) Mar . 2 0 0 4
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文章编号 :1006 9798 2004 0 1 0093 04
重组 Taq DNA 聚合酶在大肠杆菌中的表达与纯化
汪靖超 , 李荣贵
(青岛大学理工学院生物学系 ,山东 青岛 26607 1)
摘要 : 从嗜热菌 Ther m us aquat icus 中分离出的 Taq DNA 聚合酶由于其热稳定性 ,在聚
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合酶链式反应 PCR 中得到广泛的应用 ,我们根据编码 Taq DNA 聚合酶的基因序列 ,设
计出一对引物 ,通过 PCR 扩增出 Taq DNA 聚合酶基因 ,并将其克隆到表达载体 p E T -
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15b 中 ,转化大肠杆菌 E . col i BL 2 1 D E3 ,经 IP T G 诱导后 ,重组 Taq DNA 聚合酶在大
肠杆菌中实现了大量表达 。经过热变性 、亲和层析 、阳离子交换层析获得了电泳纯的重组
Taq DNA 聚合酶 。本研究的生产程序可作为 Taq DNA 聚合酶生产的一种新方法 。
关键词 : 重组 Taq DNA 聚合酶 ;表达 ;纯化
中图分类号 : Q786 文献标识码 : A
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Ther m us aquat icus 是一种水生嗜热菌 ,从该菌中分离出的DNA 聚合酶 Taq DNA 聚合酶 具有催化以
[ 1 ] (
DNA 为模板合成 DNA 的功能 , 由于该酶具有良好的耐热性 ,使其在聚合酶链式反应 polymerase chain re
action , PCR) 中得到广泛的应用 。随着 PCR 技术在医学诊断、分子生物学 、农业 、环保等领域应用的日趋广
泛 , Taq DNA 聚合酶的用量正逐年增加 。
由于 T . aquat icus 培养困难 ,并且其 Taq DNA 聚合酶的产量也不高 ,现在市售的 Taq DNA 聚合酶大都
是基因工程产品。Taq DNA 聚合酶的编码基因最初是由L awyer 等[2 ] 利用噬菌体展示技术从 T . aquat icus
的基因组 DNA 中分离出的 ,该基因全长为 2 499bp ,编码 832 个氨基酸残基 。为了获得重组 Taq DNA 聚合
酶 , 国内外已有多家实验室将 Taq DNA 聚合酶基因转至大肠杆菌进行了表达并纯
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