肠道病毒三联实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒[发明专利].pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局 *CN102367488A* (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 102367488 A (43)申请公布日 2012.03.07 (21)申请号 201110289047.0 (22)申请日 2011.09.26 (71)申请人 浙江大学 地址 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路 38 号 (72)发明人 吴亦栋 尚世强 杜立中 陈志敏 (74)专利代理机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 代理人 张法高 赵杭丽 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C12R 1/93 (2006.01) 权利要求书 1 页 说明书 6 页 序列表 2 页 附图 2 页 (54)发明名称 肠道病毒三联实时荧光定量RT-PCR 检测试 剂盒 (57)摘要 本发明提供一种肠道病毒三联实时荧光定 量RT-PCR 检测试剂盒，包含：定量RT-PCR 反应 液、标准品、对照品，其中定量RT-PCR 反应液含有 RT-PCR 缓冲液、MgCl2、dNTPs、EV 通用引物、EV 通 用型荧光探针、EV71 型荧光探针、CA16 型荧光探 针、耐热DNA 聚合酶、反转录酶。本发明试剂盒通 过一步法同时对肠道病毒通用型、肠道病毒71 型 和柯萨奇病毒A 组16 型进行检测分型，比现有的 单个检测试剂盒，不仅节约了生产成本和检测成 本，同时也提高了检测的效率和时间。并在保证没 有多对引物竞争的条件下随机自动的达到多通道 的检测目的，达到效率和技术的统一。 A 8 8 4 7 6 3 2 0 1 N C CN 102367488 A 权 利 要 求 书 CN 102367496 A 1/1 页 1.一种肠道病毒三联实时荧光定量RT-PCR 检测试剂盒，由定量RT-PCR 反应液（1）、标 准品（2）、阳性对照品（3）、阴性对照品（4）和盒体（5）组成，其中定量RT-PCR 反应液（1）有 RT-PCR 缓冲液、MgCl 、dNTPs 、EV 通用引物、EV 通用型荧光探针、EV71 型荧光探针、CA16 2 型荧光探针、耐热DNA 聚合酶、反转录酶， 检测用上游引物序列为： 5`- CCCTGAATGCGGCTAATCC -3` 检测用下游引物序列为： 5`- GATTGTCACCATAAGCAGCC-3` EV 通用型荧光探针序列为：5`FAM--ACACGGACACCCAAAGTAGTCG–3`BHQ-1 EV71 型荧光探针序列为： 5`HEX--CACACGCCCACAAGCCAGC–3`BHQ-1 CA16 型荧光探针序列为： 5`ROX--CACGCACCCTCAACCCAGG–3`BHQ-2 标准品序列为： CCCTGAATGC GGCTAATCCC ACGCACCCTC AACCCAGGCA ACTGCGGAGC ACACGCCCAC AAGCCAGCGG GTAGTGTGTC GTAACGGGCA ACTCTGCAGC GGAACCGACT ACTTTGGGTG TCCGTGTTTC CTTTTATCTT TATATTGGCT GCTTATGGTG ACAATC 阴性对照为无菌注射用水样品，阳性对照为EV71