乙型肝炎病毒（HBV）核酸（DNA）扩增检测试剂盒（荧光探针法）说明书.doc

乙型肝炎病毒（HBV）核酸（DNA）扩增检测试剂盒（荧光探针法） 说明书 【产品名称】 通用名称：乙型肝炎病毒（HBV）核酸（DNA）检测试剂盒（荧光探针法） 英文名称：Hepatitis B Virus DNA Quantitative Diagnostic Kit 【包装规格】 48 人份/盒 【预期用途】 本试剂盒采用荧光定量PCR技术，对人血清或血浆样本中的乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）进行定量检测，用于临床接受抗病毒药物治疗的乙肝患者的辅助诊断，以及抗病毒药物的疗效观察。通过对乙肝患者血清或血浆中HBV DNA基线水平和浓度变化情况的监测，用于评估抗病毒治疗的应答和治疗效果的评价。本试剂盒检测结果，不能作为乙肝患者病情评价的唯一判断指标，还需要结合患者临床表现和其他检测结果，才能对病情进行综合分析。本试剂盒不能作为血源筛查试剂使用。 【检验原理】 本试剂盒以 HBV 基因组中相对保守区的X区作为检测靶区域，设计特异性引物和特异Taqman探针对该区域进行检测，能够实现HBV 7个基因型（A-G）的检测。同时，本试剂盒采用磁珠法完成样本中病毒DNA的提取和纯化，通过加大检测样本量，保证试剂盒的检测灵敏度和精确度。另外，本试剂盒还带有内标物质，内标全程参与核酸提取和扩增过程，通过检测内标来监测假阴性结果。在PCR反应体系中引入UNG酶+dUTP措施，有效的降解扩增产物气溶胶污染，避免假阳性。 【主要组成成份】 试剂盒组成 规格 数量 主要成份 提取试剂 HBV裂解液 25ml/瓶 1 高浓度异硫氰酸胍盐溶液 磁珠悬液 480μl/管 1 纳米磁珠水溶液 HBV漂洗液 30 ml/瓶 1 含有氯化钠和乙醇的溶液 HBV洗脱液 5ml/瓶 1 高pH值的Tris缓冲液 扩增试剂 HBV PCR反应液 888μl/管 1 含有引物，探针和dNTP等的溶液 HBV酶混合液 72μl/管 1 Taq酶和UNG酶混合酶制剂 对照品 HBV阴性质控品 600μl/管 1 阴性血清或血浆 HBV阳性质控品 600μl/管 1 灭活的乙型肝炎病人血清或血浆 HBV临界阳性质控品 600μl/管 1 灭活的乙型肝炎病人血清或血浆 工作标准品 HBV工作标准品1（5.0×106IU/ml） 600μl/管 1 灭活的乙型肝炎病人血清或血浆 HBV工作标准品2（5.0×105IU/ml） 600μl/管 1 灭活的乙型肝炎病人血清或血浆 HBV工作标准品3（5.0×104IU/ml） 600μl/管 1 灭活的乙型肝炎病人血清或血浆 HBV工作标准品4（5.0×103IU/ml） 600μl/管 1 灭活的乙型肝炎病人血清或血浆 内标 HBV内标 48μl/管 1 含有内标核酸模板的溶液 警示：不同批号试剂盒中的组分不能混用或互换！ 【储存条件及有效期】 保存：提取试剂于2~8℃保存；扩增试剂于-20±5℃保存；试剂盒有效期为12个月，请在有效期内使用。 运输：采用干冰和冰袋混合形式保持低温，运输时间不应超过5天。 冻融稳定性：试剂能够承受5次的开瓶和冻融风险，而不会影响试剂的性能。 适用样本有效期：室温条件下（25±5℃）有效期至少24小时，冷藏条件（2~8℃）有效期至少20天，冷冻条件（-20±5℃）有效期至少8个月，冻融次数至少5次。 【适用仪器】 核酸扩增仪：伯乐CFX-96、ABI7500、QuantStudio 3和上海宏石SLAN96。 核酸纯化仪：DA48型半自动提取仪，DA3500（48型）全自动核酸提取仪。 【样本要求】 1 适用样本类型：血清或血浆 2 标本采集 2.1血清—用一次性无菌注射器采受检者2ml静脉血，收集于无菌离心管中，室温放置不超过4小时，待样本自行析出血清，或直接1600g离心5分钟，吸取上清（注意勿吸入红细胞）转入无菌离心管中备用。 2.2 血浆—用一次性无菌注射器采受检者2ml静脉血于含有EDTA或枸橼酸钠作为抗凝剂的无菌离心管中，立即轻轻颠倒混匀，室温放置不超过4小时，待样本自行析出血浆，或直接1600g离心5分钟，吸取上清转入无菌离心管中备用。 3 标本存放和运送：待测样本在2-8℃保存不应超过48小时；-20℃保存不超过5个月；-70℃以下长期保存，应避免反复多次冻融。 标本运输应采用泡沫盒加冰袋密封运输。 【检验方法】 试剂准备（试剂准备区） 1 取出试剂盒中的各组分，室温放置，待其温度平衡至室温后，混匀后备用； 2 根据待测样本、工作标准品1-4、阴性质控品、阳性质控品和临界阳性质控品数量，按比例（磁珠悬液10μl/人份+HBV内标1μl/人份）取相应量的磁珠悬液及HBV内标，混匀成磁珠悬液-Mix后备用； 3 取N个（N=待测样本数量+4管工作标准品+阴性质控品+阳性质控品+临