诺唯赞试剂说明书 直接扩增PCR试剂盒 Blood Direct PCR Kit V2.pdf

Blood Direct PCR Kit V2 PD103-01/02 Version 5.1 Vazyme biotech co., ltd. 产品简介 Blood direct PCR Kit可以直接对全血样本进行PCR，无需进行DNA纯化或样品预处理。可用于直接扩增的血样类型包括：新鲜血液、4℃贮存血液、冷冻血 液以及储存在Whatman 903® ® 和FTA 商用卡上的干血渍，且兼容所有常规抗凝剂(EDTA、柠檬酸盐、肝素等)。包含Phanta Blood Super-Fidelity DNA Polymerase，是在Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase基础上经过工程学改造而成的。该酶对全血样品中的PCR抑制剂具有超强的抵抗力，可扩增全血 浓度高达40% 。配以精心优化的2 × Phanta Blood Buffer V2 ，Blood Direct PCR Kit V2能够从全血样品中高效扩增长达10 kb的基因组片段。 ® Phanta Blood Super-Fidelity DNA Polymerase扩增产物为平端，适用于ClonExpress 快速克隆试剂盒(C112/C113)。试剂盒配有与哺乳动物和其他许多脊椎 动物兼容的引物预混液Positive control primer mix，可用于进行阳性对照反应。 产品组成 组 分 PD103-01 50 rxn (50 µl/rxn) PD103-02 200 rxn (50 µl/rxn) Phanta Blood Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl) 75 µl 300 µl 2 × Phanta Blood Buffer V2 1.25 ml 1.25 ml × 4 Positive control primer mix (10 μM each 50 µl 50 µl 10 mM each dNTPs 50 µl 200 µl 10 × Loading buffer 1.25 ml 1.25 ml 储存条件 -20℃保存。 质量控制 50 μl PCR体系中加入1.5 U本酶，以5 μl人全血为模板扩增7.5 kb片段。35个循环后将1/10 PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的7.5 kb条带。 注意事项 - 推荐血液模板使用量为反应总体积的1/10，即50 μl的反应体系内加入5 μl全血。 - 吸取抗凝血，尤其是长期存放过的抗凝血时，应尽量避免吸取血液凝块。 - 使用全血做为扩增模板，Phanta Blood Super-Fidelity DNA Polymerase推荐使用量为1.5 U/50 μl。提高酶的使用量有助于扩增产量的提高，但请勿超过2 U/50 μl。 - 延伸时间按30 sec/kb设定，如不足15 sec，设置15 sec即可。超过5 kb片段扩展时，如发现扩增效率较低，可适当延长延伸时间至60 sec/kb。 - PCR完成后，推荐将反应液于1,000 × g (大约4,000 rpm) 离心1～3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清进行下游分析。 使用方法 1.反应体系配制： 所有组