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T7 Endonuclease I EN303-01/02 Version 5.1 Vazyme biotech co., ltd. 产品简介 T7 Endonuclease I 识别并切割不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday 结构或DNA分叉点、异源双链DNA ；同时能以较低的速度切 割带有切刻位点的双链DNA。该酶切割错配位点5´端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。本产品是克隆重组T7核酸内切酶 I (T7 Endonuclease I ) 基因后在大肠杆菌中表达纯化的高纯度T7 Endonuclease I 活性蛋白。 产品组成 组 分 EN303-01 (250U) EN303-02 (1,250U) T7 Endonuclease I 25 μl 125 μl T7 Endonuclease I Reaction Buffer(10x) 1 ml 1 ml 储存条件 -20℃保存。 反应条件 1x T7 Endonuclease I Reaction Buffer37°C孵育 单位定义 1单位指在50 μl反应体系，37℃条件下，1小时将1 μg超螺旋十字型结构的pUC(AT) 质粒切成90%以上的线性DNA所需要的酶量。 *pUC(AT)来自pUC19 ，在其EcoRI和 PstI位点之间的多克隆位点处有修改。 质量控制 T7核酸内切酶 I 无核酸内切酶和核酸外切酶的污染。 用途 基因突变和SNP的检测，可应用于TALEN 、CRISPR/CAS9形成的突变体检测 识别错配DNA，分解四方向交叉DNA或分支DNA 检测或切割异源二聚体DNA和切割DNA 随机切割线性DNA进行shot-gun克隆 T7核酸内切酶 I 检测突变体实验方案 1. PCR扩增带有突变位点的DNA片段 1. 提取转染后细胞的基因组DNA 2. PCR扩增带有突变位点 (如TALEN或Cas9的target site) 的DNA片段，建议用高保真酶进行扩增，引物设计时，建议扩增长度为0.5-1 kb， 突变位点不要设置在片段中央，以便于切出两条大小不等的条带。每个待检测样品用以下模板设置三个PCR反应: a 靶细胞 (如TALEN或Cas9转染的细胞) 基因组DNA b 阴性对照细胞 (无特定靶序列转染的细胞) 基因组DNA c 水 (即不加模板) 诺唯赞生物 网址/ 咨询热线/400-600-9335 销售/sales@ 技术支持/support@ 技术服务/service@ Vazyme Biotech Co., Ltd Web/ Tel/400-600-9335 Sales/sales@ Support/support@ Service/service@ 3. 反应结束后，取少量扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。如目的条带单一且片段大小正确，则可进行下步实验。 4. 用磁珠或PCR产物纯化试剂盒等方法纯化PCR产物。 5. 对纯化后的PCR产物进行定量。 2. T7内切酶I酶切反应 1. 纯化后的PCR产物按下列顺序在EP管中配制反应体系: 编号 1 2 靶细胞PCR产物 200ng x µl 0 阴性对照PCR产物 200ng 0 x µl 10 x T7 Endonuclease I Reaction Buffer 2 µl 2 µl Nuclease-free Water To 19 µl