酶联免疫检测试剂盒的原理和应用(广州培训).pdf

免疫分析技术在动物源性 食品中的检测原理与应用 一、自每联免疫检测技术的基本原理 ELISA是一种免疫测定(immunoassay , IA) 抗房、或抗体的固相化及抗房、或抗体的晦标记。加入晦反 应的底物后，底物被自每催化成为有色产物，产物的量与标本 中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。 1. 抗原抗体反应的特点 可逆性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态 平衡，其反应式为: Ag+Ab • Ag-Ab 抗体的亲和力 (affini ty) ，可以用平衡常数K表示: K= [Ag-Ab] / [Ag] [Ab] ， Ag-Ab 的解离程度与K值有关。高亲和 力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合 ，两者结合牢固，不易解离O 解离后的抗原或抗体均能保持 原有的结构和活性。 敏感性 ①化学比色法的敏感度为mg/ml水平O ②晦反应测定法的敏感度约为5-10μg/mlo ③免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与国每反应法相仿。 ④标4己的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平O 例如，氯霉素、吹口南吐白同类药物，其敏感度可达0.05ng/ml以 下O • 3 特异性 抗房、抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位，点 之间o 化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。 即"钥匙与锁"的关系o 与类似物的交又反应率是评价特异性的技术指标。 2 、 ELISA中常用名词 免疫房、性的小分子物质.女口药 物，多糖，类脂等 2. 2 抗原:凡是能刺激机体产生免疫应答并能与应答产物特异结 合的物质 2. 3 载体:赋予半抗原具有免疫原性的蛋白质分子，即为载体. 2. 4 抗体:可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白O 2. 5稳定性:通常用户指的稳定性既指试剂盒的保存期，又指试 剂金不同批次的均一性 2. 6. 特异性:试剂金特异性一般指试剂金出现假阳性或假阴性的 概率 2. 7 准确度:一般用回收率来表示，是评价试剂金好外的重要指标 2 、 ELISA中常用名词 :指测定值(平均值)与真实值的接近程度，表示分析结果的正 确性.由于无法知道桐的真实浓度，故通常采用添加回收率来表示: 回收率二(测定值-空白值)/添加量 2.9精密度:才旨用某种方法重复测定同一均质样品所得测定值的彼此接 近程度，表示分析结果的重复性. 2.10检汲1J ftt:检测限指分析方法能够从桐的背景信号中检测出待测物存 在时所需的最低浓度. 2.11定量限:指分析方法能够对样品中的待测物进行定量测定的最低浓 度. 3 、 ELISA的必要试剂 也可用于测定抗体。在这种 测定方法中有三个必要的试剂: ( 1 )固，相的抗房、或抗体，即"免疫吸附剂" (immunosorbent) ; ( 2 )晦标记的抗原或抗体，称为"结合物" (conjugate) ; ( 3 )晦反应的底物。 可设计出各种不同类型的检测方法，药物残留常采用如下 原理进行实验。 4、 ELISA原理图 一一 酶丁 直接竞争法(包抗体) : 「峰标记抗原 1.将抗体包被在固相载体上。 抗刀子、|