《医学微生物学实验》脓汁和粪便标本中病原菌的检测.ppt

常见肠道感染细菌主要生化反应特征 葡萄糖 乳糖 半固体（动力） 大肠埃希菌 ⊕ ⊕ + 福氏志贺菌 + - - 伤寒沙门菌 + - + 霍乱弧菌 +★ - + 幽门螺杆菌 不分解糖类 + 变形杆菌 ⊕ - + ★产酸能迅速杀死该菌。 细菌生化反应结果分析(结果录入） 甲、乙→紫黑 丙、丁→粉红 ↓ ↓ 组号 ①葡萄糖 ②乳糖 半固体 ③葡萄糖 ④乳糖 半固体 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 结果 细菌生化反应结果分析(妇幼、病理） 甲、乙→紫黑 丙、丁→粉红 ↓ ↓ 组号 ①葡萄糖 ②乳糖 半固体 ③葡萄糖 ④乳糖 半固体 1 ⊕ ⊕ ++ + - -- 2 ⊕ ⊕ ++ - ⊕ ++ 3 ⊕ ⊕ ++ + -- --- 4 ⊕ ⊕ ++ + - -- 5 ⊕ ⊕ ++ + - -- 6 ⊕ + ++ + - -- 7 + + ++ + - -- 8 + + ++ ⊕ - -- 9 + ⊕ ++ + - -- 10 ⊕ - ++ ⊕ + ++ 结果 ⊕ 细菌生化反应结果分析(预防-2） 甲、乙→紫黑 丙、丁→粉红 ↓ ↓ 组号 ①葡萄糖 ②乳糖 半固体 ③葡萄糖 ④乳糖 半固体 1 ⊕ ⊕ ++ + - -- 2 ⊕ ⊕ ++ + - -- 3 ⊕ ⊕ ++ + - -- 6 ⊕ ⊕ ++ + - -- 7 ⊕ + ++ + - -- 8 ⊕ ⊕ ++ + - -- 结果 ⊕ 实验结果错误的分析 纯培养时，菌落挑错了、不是单菌落、CFU。 无菌操作不严格，污染杂菌。 接种时未协调好，接种错误。 玻片凝集试验 Slide Agglutination Test 在适量电解质存在的情况下，颗粒性抗原(细菌)与特异性抗体结合，如果比例合适，则出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。 取洁净的载玻片一张，将磨面近端设为对照区，滴加生理盐水15ul。远端设为试验区，滴加福氏志贺菌诊断血清15ul， 用接种环分别取粉红色菌苔，约1～2个小菌落的菌量，研磨于盐水或血清内，混合均匀。 ※载玻片来回倾侧，让菌液充分混 匀，凝集速度更快、结果更清楚。 ※菌液凝集者记为阳性，菌液均匀混浊记为阴性。 研磨成直径8～10mm的一层薄菌膜。 玻片凝集结果判定 玻片来回倾侧数次，肉眼观察；2～3分钟内仍不出现凝集者,可认为阴性(－)。 ……;菌液混浊，少量絮状,25%凝集,阳性(＋)。 ……;菌液轻度混浊,絮状凝集块较小,阳性(＋＋)。 ……;菌液澄清,有明显絮片,75%凝集,阳性(＋＋＋)。 生物安全警告 本次实验操作，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐着，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。 灭菌 药敏试验平板、动力试验半固体琼脂、微量糖发酵管→高压蒸汽灭菌 ! 器材收摊入柜前，接种环，接种针必须再次烧灼灭菌！ 综合性实验一 实验总结 采用平板划线分离法，从浓汁标本中分离出金黄色和白色两种菌落。显微镜下，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌；结合菌落或菌苔颜色，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌。 用伊红美蓝平板，从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽和粉红色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖的致病菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希菌和福氏志贺菌。 脓汁和粪便标本细菌检测结果 标本 菌落 形态 血浆 凝固酶 葡 乳 半 福痢血清 青 链 庆 结论 金黄 G+球 + + + + 金黄色 葡萄球菌 脓汁 白色 G+球 - + + + 白色 葡萄球菌 紫黑 G－杆 ⊕ ⊕ + - + + 大肠 埃希菌 粪便 粉红 G－杆 + - - + - + + 福氏 志贺菌 细菌鉴定的原则及基本方法 必须用纯的细菌培养物作鉴定。因为不同的细菌生化反应结果相差较大，而反应结果是以阳性或阴性表示的，一旦用混合菌做生化反应，结果不可分析。 鉴定试验的选择：测定细菌的实验方法很多，根据鉴定目的选择适当的试验项目，既能完成鉴定，项目又尽可能少。一般考虑以下几