精制芎归缓控释滴丸及其相关边问题的分析.docx

精制芎归襞控释滴九及其相关问题的研究 精制芎归缓控释滴丸及其相关问题的研究 博士研究生李慧 导 师王一涛教授 (中国中医研究院中药研究所) 中文摘要 川I芎为伞形科植物JII芎Ligusticum chuanxlong l{ort．的干燥根茎，当归 为伞形科植物当归Angetica sinensi；(otj订Diet s，的干燥根。它们同属一 科，有着相似的功能主治，常常以药对形式在活血和血的处方中同时出现。据 统计，2000版药典所载38 8首成方制剂中有34首川芎、当归同用处方。而川I 芎与当归二者伍用成方最早出自“芎翦汤”，主治血虚、血瘀头痛，产后瘀血 腹痛，风湿痹痛等。以中医药基本理论为指导，采阁先进的科学技术手段，深 入而系统地探索传统复方中药剂型的现代化，无疑已成为当今十分重要而紧迫 的研究课题。 组成复方“芎翦汤”的川芎和当归两味中药材，气味芳香，含有大量的挥 发性成分。依据药材产地、采收季节、保存时间、干鲜程度不同，挥发油中含 量最高的藁本内酯可达50％一80％。但是藁本内酯的化学性质极不稳定，川 芎蒸馏液3 7℃放置3个月后，挥发油戚分及相对含量均有较大变化，最为突 出的是蕖本内酯峰已基本消失，藁本内酯和其他内酯类化合物的分解产物峰含 量已增至72．04％。奉课题选取复方“芎翡汤”为“模型药物”，制备成芎归缓 控释滴丸剂，并对相关问题进行了如下研究：a．寻找严重影响藁本内酯稳定性 的主要因素，确立藁本内酯稳定化的关键技术，确保制剂的有效与稳定；b．用 固体分散技术对中药有效提取部位制备成缓控释制剂进行初步探讨，筛选中药 缓控释滴丸处方，制备全新意义上的中药缓控释滴丸剂；c．惜助首次建立的川 芎、当归药材中羹本内酯体内外的HPLC捡测方法，对动物体内藁本内翡的药代 动力学过程进行评价；d．拓宽中药滴丸剂的剂型品种，为中药新药开发奠定实 验基础。 实验过程中以精制芎归缓控释滴丸荆的研制为日的，分别对制剂中指标成 分的定性。定量(含藁本内酯标准品的割各)、药材的提取工艺、精制纯化工 艺、药理作用筛选、精制提取物的稳定性以及滴丸剂的制备处方确定、体内外 释药情况的评价等进行了具体研究，试验结果分述如下： 中药化学对照品是中药质量研究、质量检测和质量控割使用的实物对照，  精制芎归缓控释滴丸及其幅关问题的研充 使用标准物质是保证和评价分析测试质量的重要手段。由于藁本内酯的稳定性 差，严重制约了标准物质的研究，尚未有法定标准的藁本内酯化学对照品出售。 本实验先期从川芎药材中用制备性薄层层析色谱法分离纯化得到藁本内酯单 体，与标准图谱对照有一致性，为后期工艺筛选、质量控制以及体内药物动力 学研究提供了物质基础。 采用简便而实用的TLC定性鉴别方法，对药材和制剂中稳定性差的有效成 分蔓本内酯迸行定性鉴别，并且在文献报道的基础上首次建立了flPLC法检测 川芎药材中藁本内酯的含量，进样量在0．492“g～14．76 u g浓度范围内呈良 好线性关系，灵敏度高、重现性好，主峰与其它杂质峰能达基线分离，加样回 收率在98*A以上，测定结果2．5h内稳定，能较好地满足本研究的分析测试要 求。 四』|】灌县作为川芎道地产区有千年历史之久，为考察药材是否真正具备道 地性，选取五种四川省出产的芎剪进行高效薄层色谱定性检查，对药材的乙醚、 乙醇提取部分以及水煎煮部分点样分析，结果证实灌县川芎作为道地药材沿用 至今是有其物质基础的。 川芎、"-3归药材富台挥发油，苯酞内酯类成分构成了挥发油的主体，与传 统水蒸气蒸馏法相比较，新若起的超临界cO，流体萃取技术更适合此类不稳定 成分的提取。采用(k34)正交试验，以萃取油中藁本内酯的绝对含量为考察指 标，结合TLC和GC-MS检测，确定最佳提油工艺为：在萃取压力25MPa，萃取 温度40"C的条件下，泵入经制冷压缩过的高压c0：流体，待系统温度、压力达 平衡时，维持静态萃取3{3min，再动态莘取2h。试验结果表明：苹取分离效能 佳，有效成分保留率提高一倍以上，对川芎、当归提油不失为一种温和的提取 方法。 由于中药成分与药理作用具有多样性，在苹取油精制过程中采用了药理活 性和化学成分相结合的筛选方法。芎归苹取油用一般酸碱处理、减压分馏和上 柱分离的方法精制处理分别得到X6RE I、Ⅱ、IlI，以对原代培养大鼠大脑皮 层神经细胞缺血损伤及对硝酸甘油型偏头痛sD大鼠神经细胞凋亡的影响2个 实验、综台评定不同精制提取物的药理活性。试验结果显示：a．XGRE I、ⅡI 给药组可以改善缺血神经细胞的形态异常，提高神经细胞存活率和神经细胞活 性，降低神经细胞胞内钙离子浓度。XGREII作用相对偏低。b．XGRE I、III给 药组能改善硝酸甘油型偏头痛sD大鼠神经细胞超微结构异常，降低总体凋亡 发生率(使