160410脑脊液标本微生物学检验.ppt

* * 乙脑病毒抗体测定 (1)特异性IgM抗体测定：　　①免疫荧光技术：用间接免疫荧光法测乙脑特异性IgM抗体，阳性率高，可达97%，有快速敏感的特点。　　②捕获法ELISA(MAC-ELISA)：近年采用MAC-ELISA法检测乙脑特异性IgM具有较强的敏感性与特异性，阳性率为74.4%，其中在病程第4天出现阳性者为93%，可用于早期诊断。　　③ABC-ELISA：检测乙脑特异性IgM抗体敏感，阳性率高，可达到75.3%，用于早期诊断。 * * 乙脑病毒抗体测定 (2)血凝抑制试验：血凝抑制抗体于病程第5天出现，第2周达高峰，可维持1年以上，血凝抑制试验的阳性率可达81.1%，高于补体结合试验，但有时出现假阳性，是由于乙脑病毒的血凝素抗原与同属病毒如登革热及黄热病病毒等有弱的交叉反应，故双份血清效价呈4倍以上升高或单份效价达1∶80以上可作诊断依据，此法操作简便，可应用于临床诊断及流行病学检查。 (3)补体结合试验 (4)中和试验： * * 单纯疱疹病毒ELISA 双份脑脊液做HSV抗体的动态测定，发现脑脊液抗体有升高趋势，滴度达1：80以上，血与脑脊液抗体比〈40，双份脑脊液单纯疱疹病毒抗体滴定度增高达４倍以上； 标本中HSV－1的IgM抗体阳性者有诊断意义。 * * 病原体核酸检测 技术： PCR和DNA探针杂交 临床意义： 适用于临床标本中尚不能分离培养或很难分离培养的病原微生物，如病毒的检测 优点： 高度的特异性 很高的敏感性 检测范围广泛 快速 * * 病原体核酸检测 1.脑膜炎奈瑟菌:PCR,用于检测病人脑脊液中存在的脑膜炎奈瑟菌DNA,特异性与阳性率均高于其他方法。 2.结核分枝杆菌：操作中需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。又细菌L型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出DNA，以致造成PCR假阴性。 3.单纯疱疹病毒:PCR 乙脑病毒、肠道病毒:RT-PCR * * 脑膜炎奈瑟菌脑膜炎的实验诊断 ①皮肤瘀点标本涂片，检出率较高，可达80%以上；②血液培养在败血症期、爆发休克型和慢性败血症型脑膜炎中，检出阳性率较高，是本病诊断的重要手段；③用免疫学方法，如ELISA，对流免疫电泳等，检测血液、CSF以及尿液中脑膜炎奈瑟菌抗原，阳性率约为70%。 * * 肺炎链球菌脑膜炎的实验诊断 脑脊液中有大量脓细胞；多数病例涂片可见革兰阳性双球菌。患者CSF对流免疫电泳阳性率可达79%；乳胶凝集试验的阳性率为90%。 * * 流血嗜血杆菌脑膜炎的实验诊断 CSF沉渣涂片和培养是诊断本病的主要依据。涂片可见革兰阴性球杆菌或短小杆菌，阳性率可达80%，应与肺炎链球菌鉴别。可应用酶联免疫吸附试验等免疫学方法检测CSF中流血嗜血杆菌荚膜多糖抗原，从而迅速做出病原学诊断。 * * 结核性脑膜炎的实验诊断 脑脊液离心浓缩后涂片抗酸染色，镜检若见抗酸杆菌可确诊；培养阳性亦可确诊，进一步做药敏试验可指导临床合理治疗。脑脊液结核抗体阳性具有诊断价值。 * * 新生隐球菌脑膜炎的实验诊断 CSF涂片用印度墨汁染色较易发现新生隐球菌，只有在CSF或脑组织标本中检出新生隐球菌才可确诊为新生隐球菌脑膜炎。但CSF检查并非每次均能检出该菌，因此需多次反复检查。CSF培养2~10天可有新生隐球菌生长。新生隐球菌荚膜多糖抗体、抗原检测阳性有助于诊断，但需要注意CSF乳胶凝集试验法中的假阳性问题。 * * 隐球菌 深部感染真菌检验 6.抗原检测 利用单克隆抗体，直接或通过乳胶凝集试验、ELISA等免疫学方法检测新生隐球菌荚膜多糖特异性抗原，已成为临床的常规诊断方法，其中以乳胶凝集试验最为常用。 * * 脑曲霉病的实验诊断 CSF涂片染色不易发现曲霉菌菌丝及孢子，但培养可见黄绿色毛状菌落生长。由于该菌为条件致病菌，故必须经多次培养阳性并结合临床表现、脑组织活检或颅脑手术后病理检查，于病理组织中找到曲霉菌才能确诊本病。 * * 神经梅毒的实验诊断 主要依据脑脊液常规检查及脑脊液的梅毒抗体检查试验结果。脑脊液VDRL检查阳性、脑脊液FTA-ABS阳性、脑脊液梅毒特异性 IgG增高有助于诊断。 * * 单纯疱疹病毒性脑炎（HSVE）的实验诊断 因HSV引起的脑炎难以诊断，所以脑组织的活检是惟一有效的方法，在脑组织活检标本中可发现病毒或嗜酸性包涵体。另外，为了缩短检测时间，尽快确诊病原体，建立了一些快速诊断检测，目前常用的是免疫荧光染色法。若给予及时的治疗，HSV引起的脑炎会预后良好。值得注意的是，在患者脑脊液中发现IgG，可诊断为HSV性脑炎，但由于IgG的产生需要几周的时