海带遗传转化模型的优化及目的基因的导入研究.pdf

刁冬用几 .31冬创俘dI吐甲呀布勿下匕喇呜理 的七忆呼七之气目的基 因的辱a 中月斗花陀A匕到卜月斤节阵d匕t全文 摘 要 海带遗传转化模型是以基因枪转化海带雌配子体，转化后诱导生成孤雌生殖 抱子体.本文以Iacz报告基因染色结果显示，原有孤雌生殖途径只能实现外源 基因的低效率与嵌合式表达。发展了雌 (或雄)配子体转化后受精发育生成二倍 体抱子体的新途径，均可实现IacZ报告基因的稳定表达。其中，雌配子体途径 (转化后与正常雄配子体受精)的结果与孤雌生殖途径相仿，而雄配子体途径(转 化后与正常雌配子体完成受精)可大幅提高转化效率与表达效率，有3.5%的植 株实现均一性表达，提示外源基因的整合发生在单细胞阶段。 沿用原有孤雌生殖途径，转化人乙肝病毒表面抗原(HBsAg)基因，在孤雌 生殖抱子体中检测到HBsAg的整合与表达。定量ELISA显示表达水平为 0.125-2.497gg1(mg可溶性蛋白)，平均为。.587闻 (mg可溶性蛋白)，即2.25 克鲜海带的抗原表达量等同于静脉注射免疫所需15vg抗原。继而利用雄配子体 途径也实现了HBsAg在海带二倍体抱子体中的稳定表达，提示利用海带表达口 服乙肝疫苗具有一定可行性. 本文结果为大型海藻遗传转化提供了一条可能的新途径，即转化袍子后利用 自然的发育过程生成转基因植株:实现了大型海藻中第一个目的基因的导入与表 达。 关键词:海带 ((Laminariajaponica)，配子体，IacZ基因，HBsAg(乙肝病毒表 面抗原)基因，基因工程 刁咚月岛 创卜带 .吐甲全月勿乍匕翻比月趁的节七下忆及 目的刁‘因的县户、 中冲斗花吧sl卜倒卜月斤们阵寸州仑3忆 OptimizationoftransformationmodelofLaminariajaponica (Phaeophyceae)andintroductionofa vaccinegene Abstract JiangPeng(MarineBiology) DirectedbyProfQinSong TheoriginaltransformationmodelfortheseaweedLaminariajaponica (Phaeophyceae)employedfemalegametophytesasmicro-particlebombardment targetsandparthenogenesisasaroutetoproducetransgenicparthenosporophytes.By usingtheoriginalmodel,insitudetectionforIacZexpressionwascarriedoutinthis thesisandresultedinlowtransformationefficiencyandchimericexpressionpattern. Newapproachesweredevelopedinthisstudybytransformingfemaleand/ormale gametophytesfollowedbyinbreedingprocess.LacZexpressionwasdetectedin zygoticsporophytesgeneratedbybothfemale-ormale-targetedtransformation.The formershowedsimilarresultstoparthenogenesispathway,whilethelatterledto highertransformationandexpressionefficiencyand3.5%zygoticsporophyteswere stainedall-blue,implyingtheintegrationofIacZatone-cellstage. AvaccinegeneencodinghepatitisBsurfaceantigen(HBsAg)wasbombardedin