大鼠MCAO模型的制作要点详解.ppt

大鼠MCAO模型的制作 原理 MCAO即大脑中动脉闭塞，该模型阻断颈外动脉及其分支，且阻断翼腭动脉，以切断颅外来源的侧副循环血流。从颈外动脉插入栓线，经颈内动脉到大脑前动脉，机械性阻断大脑中动脉发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。 如果需要再灌注，只需拔出栓线结扎伤口，即可恢复大脑血供 实验前准备工作（1） 手术器械+取脑器械：清洗干净，简单消毒 其他：干棉球，酒精棉球，大鼠板，固定线，自制拉钩，培养皿 麻醉药：NS配制的10%水合氯醛，用法为0.35ml/100gIP，手术过程中可用1/4～1/3倍液追麻 TTC染液：NS配制的1%红四氮唑溶液，现配现用，2℃～4℃避光保存 实验前准备工作（2） 栓线选择：准备直径0.205mm、0.235mm、0.26mm三种粗细的鱼线，实验中根据大鼠体重以及大鼠个体差异调整 栓线处理：取一段5cm长的鱼线，在一端以及2cm、2.2cm处分别用记号笔作一个标记，垂直在熔化的石蜡中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄层石蜡可牢固地粘附在鱼线一端的表面 实验方法（1） 动物麻醉后仰卧位固定在鼠板上，剪毛后用75%乙醇简单消毒，颈正中线开口 实验方法（2） 沿正中钝性分离两侧鼓泡腺体，暴露颈前肌群 沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，暴露颈总动脉及分支 这两步均用弯头止血钳进行钝性分离 实验方法（3） 首先分离颈总动脉并穿单线备用 沿颈总动脉向远心端依次分离出颈外动脉、甲状腺上动脉、枕下动脉以及颈内动脉，在颈外动脉及枕下动脉穿双线备用 实验方法（4） 双线结扎颈外动脉和枕下动脉后剪断血管，在颈外动脉残端上用单线打一个松结 动脉夹夹闭颈总动脉近心端以及颈内动脉，颈外动脉残端上45度剪一小口，向颈内方向插入栓线，扎紧固定线，松开动脉夹 实验方法（5） 用眼科镊向为内上方轻推栓线，从血管分叉处开始算距离，当插入深度到达鱼线的标记处时，扎紧固定线 若鱼线堵在在1cm处，是误进翼颚动脉，若在1.6cm堵住，则是卡在了入颅处。此时都应回抽鱼线调整方向再进线，反复试几次还不行最好换根栓线，很可能前端已经变形 如果是再灌注模型，则在缺血一定时间后拔出鱼线，结扎死颈外动脉残端就能恢复颈总到颈内的动脉血供 实验方法（6） 待大鼠苏醒后，观察症状，模型成功可见大鼠向对侧绕圈或追尾、倾倒 神经功能缺失体征评分 参考Longa 5 分制法，缺血24h 后进行评分。 0 分:无神经损伤症状; 1 分:不能完全伸展对侧前爪; 2 分:向对侧转圈; 3 分:向对侧倾倒; 4 分:不能自发行走,意识丧失。 分值越高,说明动物行为障碍越严重 实验方法（7）-取脑 脱颈椎处死大鼠，剪开皮肤暴露头及颈段，从颈椎处剪断颈髓， 去除肌肉和颅骨上的膜，剪刀伸进去0.8cm～1cm，沿正中以及两侧45 度分别剪一刀，用大号弯头止血钳去除颅骨 眼科镊拉断硬脑膜，取出脑组织 实验方法（8）-染色 脑组织用NS冲洗净表面的毛和血迹，-20 ℃速冻10min后切片5～6片：第一刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。 切片置1%TTC染液中，60℃烘箱中染色10min 用image pro-plus 6.0 软件计算梗塞面积 讨论 优点 不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间 对全身影响小、动物存活时间长，适于慢性脑损伤的研究 缺点 非直视下的手术 动物品系、体重、批次会影响结果。 操作者手术熟练度要求较高 注意保温 动作轻柔熟练 麻醉药用量宁少勿多 控制进线深度 线拴法有一定的死亡率，淘汰率也比较高，做好预试 模型不成功的大鼠要记录和总结 谢谢！ * * * * * *