(1.4.10)--生化实验四 酶生物化学生物化学.ppt

*实验项目四

蔗糖酶与淀粉酶的专一性

影响酶促反应速度的因素教学目的： 一、掌握酶专一性的原理，影响酶促反应速度的常见因素。用Benedict试剂检测还原性糖的原理和方法。

二、熟悉实验操作流程，酵母蔗糖酶和唾液淀粉酶的制备、采集方法，淀粉及糊精与碘成色反应的原理及现象。

三、了解淀粉及蔗糖的分子结构及淀粉与蔗糖被酶水解的化学反应。

原理： 酶有专一性：一种酶只作用于一种或一类化合物的化学键。

蔗糖酶只能水解蔗糖为葡萄糖和果糖

淀粉酶只能水解淀粉为糊精和麦芽糖原理：蔗糖（无还原性）——葡萄糖和果糖（有还原性）

淀粉（无还原性）——糊精和麦芽糖（有还原性）原理：检测还原糖的方法

①班氏（Benedict）试验：

还原性糖的醛基或酮基与班氏试剂内的Cu（OH）2在碱性的条件下反应，生成红棕色的Cu2O沉淀。

可通过比较红棕色沉淀的多少来判定酶反应中生成还原性糖的量。原理：检测淀粉水解程度的方法：

淀粉与碘（I2）的呈色反应：

基本原理是I2与淀粉的羟基可形成兰色络合物。

高温、高pH可干扰I2与淀粉的呈色反应。

高温可使I2与淀粉不能吸附而不显色，所以60℃管要先冷却，然后再加I2；原理：而I2在碱性条件下，可发生如下反应：

I2+2OH-→I-+OI-+H2O，

只有用HCl酸化后,I2才在溶液中存在

I-+OI-+2HCl→I2+H2O+2Cl-

所以pH=8的那个试管要先酸化后再加I2液。操作步骤

一、酶的专一性

1、实验者先取一一次性杯子，用纯净水漱口，然后含一口水在口中约1~2分钟（含的时候思考些精美食物效果更佳）。

2、将口中的水吐入小烧杯（或纸杯），用一薄层脱脂棉滤除食物中的残渣（直接滤到量筒内）。

3、加蒸馏水稀释1~2倍（男生可多加水稀释）

操作步骤

一、酶的专一性

4、检查试液中的还原性物质：

取2支试管：

1号加蔗糖10滴和班氏试剂2mL

2号加淀粉10滴和班氏试剂2mL

将两支试管置于沸水浴中3分钟。

观察结果：如果溶液仍然蓝色透明，说明可以使用。操作步骤

5、取4支试管，按下表添加试剂：各管混匀后置于38-40度水浴中保温30分钟然后各管中加入班氏试剂2mL，混匀，置沸水浴中3分钟，流水冷却，观察结果1054105210531051管号1%蔗糖1%淀粉蔗糖酶稀释唾液试剂（滴）结果（供参考）

大量沉淀淡绿色透明蓝色透明大量沉淀各管混匀后置于38-40度水浴中保温30分钟然后各管中加入班氏试剂2mL，混匀，置沸水浴中3分钟，流水冷却，观察结果1054105210531051管号1%蔗糖1%淀粉蔗糖酶稀释唾液试剂（滴）操作步骤

二、底物浓度对酶促反应速度的影响各管混匀后置于38-40度水浴中保温3分钟。然后各管中加入稀释唾液10滴，混匀，置于38-40度水浴中保温30分钟，再加班氏试剂1mL，混匀，置沸水浴中5分钟，流水冷却，观察结果51052155321351管号1%淀粉蒸馏水pH6.8磷酸缓冲液试剂（滴）*