(1.4.8)--生化实验二 蛋白质的变性与沉淀.ppt

*实验项目二

蛋白质的变性与沉淀教学目的：

一、掌握蛋白质变性的基本原理和常用方法

二、通过实验加深对蛋白质变性和变性后所发生现象的理解

主要内容：二、通过实验理解“蛋白质变性不一定沉淀，沉淀不一定变性”。一、学习几种常见的使蛋白质变性与沉淀的方法。通过实验了解检查蛋白尿的方法、蛋白质变性在消毒、解救重金属盐中毒及食品加工中的应用等。

三、变性蛋白质调节到等电点附近时一般可以结絮沉淀。乙醇沉淀蛋白质，在室温下易使蛋白质分子的次级键破坏而引起变性，而低温短时间接触则可发生沉淀但不变性。（一）蛋白质加热凝固

1、取一支试管，加卵清稀释液20滴，加热至沸（观察并记录实验结果）→冷却后加10mL蒸馏水→摇动观察沉淀是否溶解（记录实验结果）。2、取一支试管（15*150mm），加待检尿至1/3-1/2处，将试管尿液的上半部分至于酒精灯上煮沸（观察并记录实验结果）→滴加5%醋酸2-3滴，观察沉淀是否增多或溶解（记录实验结果）。（二）三氯醋酸、磺基水杨酸沉淀蛋白质1、取一支试管，加卵清稀释液20滴，5%三氯醋酸10滴（观察并记录实验结果）→加10mL蒸馏水→摇动观察沉淀是否溶解（记录实验结果）。2、取待检尿2mL,沿试管壁缓慢加入5%磺基水杨酸20滴→观察两层溶液的界面有无浑浊出现（记录实验结果）。（三）重金属离子沉淀蛋白质1、取一支试管，加卵清稀释液10滴，加0.2%NaOH1滴，摇匀→再加10%ZnSO45滴（观察并记录实验结果）。2、取一支试管，加卵清稀释液20滴→加2%Pb（AC）22滴（观察并记录实验结果）。*