(1.4.2)--RNA的测定生物化学生物化学.ppt

实验RNA含量的测定［目的］1.掌握DNA、RNA含量测定的方法和原理；2.掌握标准曲线的绘制及分光光度计的使用。

实验RNA含量的测定［原理］ 核酸是由戊糖（核糖或脱氧核糖）、磷酸、嘌呤碱及嘧啶碱所组成的多核苷酸。无论是DNA，还是RNA，其戊糖，磷酸和碱基的分子比均为1:1:1。因此，在一定条件下，可通过测定核酸中的戊糖或磷酸或碱基含量而对核酸进行定量，前两种方法分别称为定糖法、定磷法。

实验RNA含量的测定［原理］ RNA与浓盐酸共热酸解生成嘧啶核苷酸、嘌呤碱及核糖。核糖在浓酸中脱水环化成糠醛。糠醛与3，5-二羟甲苯（苔黑酚，地衣酚）作用显示蓝绿色。该反应需要三氯化铁或氯化铜作催化剂。反应产物在670nm有最大吸收，待测样品中若RNA在5-50μg/mL之间，则吸光度与RNA的浓度成线性关系。

实验RNA含量的测定［仪器］1.15×150mm试管及试管架2.吸管3.沸水浴4.722s-分光光度计

实验RNA含量的测定［试剂］ 1.缓冲盐溶液0.15mol/NaCl；0.01mol/L柠檬酸钠，pH7.02.待测RNA溶液3.标准RNA溶液（0.05mg/mL）4.苔黑酚试剂5.5％TCA（三氯醋酸）

操作步骤

取8支试管，按下表添加试剂：试剂（mL）管NA标准液待测RNA液5%TCA苔黑酚试剂0-220.2-1.820.4-1.620.8-1.221.2-0.821.6-0.422.0-02-0.21.82

摇匀，置沸水浴15分钟，冷却后，于670nm波长比色，绘制标准曲线，求得样品管含量。标准曲线，后补。