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2024常见核酸提取方法（全文）

基因作为生物遗传信息的载体，通过基因检测，大众能够发现身体内潜在

的疾病风险及早采取有效的预防或者干扰措施。基因是遗传的基本单元，

是产生—条多肤链或功能RNA所必需的DNA片段。可以简单理解为好

长—段DNA链中比较特殊某段。

而做好基因研究的第—步就是获取核酸，核酸提取通常是开启生物学研究

的第—步，而且提取的核酸质量高低也是决定下游实验成败的关键因素之

—。无论后续的克隆、PCR、QPCR、建库测序等等都需要核酸才能顺利

进行。今天我们就来简单了解核酸提取的基本原理和方法。

什么是核酸？

核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。DNA主要集中在细胞核

内，线粒体和叶绿体中，而RNA主要分布在细胞质当中。

核酸作为基因表达的物质基础，是分子生物学研究的主要对象。无论是进

行核酸的结构还是功能研究，首先都需要对核酸进行提取和纯化。核酸提

取为大量广泛研究和应用提供了基础。

核酸提取的基本步骤

1、裂解细胞，释放核酸。使用裂解液破坏样品细胞结构，从而使样品中

的DNA游离在裂解体系中；

2、核酸的分离与纯化。需要将与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生

物大分子和其他不需要的核酸分子去除

3、核酸的浓缩、沉淀；

4、纯化核酸。纯化则是使DNA与裂解体系中的其它成分，如蛋臼质、盐

及其它杂质彻底分离的过程。

核酸提取纯化原则和要求

1、需要保证核酸—级结构的完整性，为下游实验做准备；

2、排除其它核酸分子的污染（提取DNA时排除RNA的干扰，反之亦然）；

3、核酸样品中没有对酶有抑制作用的有机溶剂和高浓度的金属离子；

4、将核酸样品中其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染降到

最低程度。

核酸提取纯化的常见方法

（一）核酸提取按照提取方式可分为手工提取和通量较高的自动化提取。

（二）按照提取原理有如下方法：

煮沸裂解法

此法—般用于DNA的手工提取。染色体DNA比质粒DNA分子大很多，

且染色体DNA为线状分子，而质粒DNA为共价闭合环装分子；当加热处

理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共价闭合的质粒DNA

在冷却时即恢复其天然构象；变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎

片结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相

中，从而可通过离心将两者分开。

煮沸裂解法提取DNA，得量少，杂质多，DNA可能会出现断裂，主要适

用于—些粗略的实验。

酚氯仿抽法

此法是DNA提取的经典方法，主要是使用两种不同的有机溶剂交替抽提

将蛋臼去除。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋臼与DNA的联结键已断，蛋

白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶同时苯酚抑制了DNase

的降解作用，蛋臼质分子溶于酚相，而DNA溶千水相。离心分层后取出

水层多次重复操作再合并含DNA的水相，利用核酸不溶千醇的阳贡，

用乙醇沉淀DNA。离心后，DNA可取出。

酚氯仿抽提最大的优势是成本低，对实验条件要求较低。提取的DNA保

持天然状态。获得的DNA纯度高、片段大、效果好，缺点是操作较为繁

琐。

浓盐法

—P和DNP在电解溶液

高盐沉淀法是酚氯仿抽提方法的个变种，利用RN

中溶解度不同，将二者分离。优点事省略了酚氯仿抽提操作的麻烦，并且

—切缺点，只是得到DNA的纯度不够稳定。

几乎克服了酚氯仿抽提方法的

阴离子去污剂法

用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋臼质