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分子荧光分析技术荧光分光光度法测定核黄素主讲教师：中山职业技术学院赵冬梅一.实验目的1.学习荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的分析原理。2.掌握荧光光度计的操作技术。二.实验原理维生素B2，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶。维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂。在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。维生素B2水溶液在430-440nm蓝光或紫外光照射下会发生绿色荧光，荧光峰在535nm，在pH6-7的溶液中荧光强度最大，在pH11的碱性溶液中荧光消失。多维葡萄糖中含有维生素B1，C，D2及葡萄糖均不干扰维生素B2的测定。由于维生素B2在碱性溶液中经光线照射，会发生光分解而转化为光黄素，后者的荧光比核黄素的荧光强的多。因此，测量维生素B2的荧光时，溶液要控制在酸性范围内，且须在避光条件下进行。三.仪器与试剂荧光分光光度计。10μg/mL维生素B2标准溶液：准确称取10.0mg维生素B2，用热蒸馏水溶解后，转入1L棕色容量瓶中，冷却后加蒸馏水至标线，摇匀，置于暗处保存。冰乙酸（AR）；多维葡萄糖粉试样。四.实验内容(1)标准曲线的绘制于6只50mL容量瓶中，分别加入10μg/mL维生素B2标准溶液0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL，再各加入冰乙酸2.0mL，加水至标线，摇匀。在970CRT荧光分光光度计上，用1cm荧光比色皿于激发波长440nm，发射波长540nm处，测量标准系列溶液的荧光强度。(2)多维葡萄糖粉中维生素B2的测定准确称取0.15-0.2g多维葡萄糖粉试样，用少量水溶解后转入50mL容量瓶中，加冰乙酸2mL，摇匀。在相同的测量条件下，测量其荧光强度。平行测定三次五.实验记录及数据处理以相对荧光强度为纵坐标，维生素B2的质量为横坐标绘制标准曲线。从标准曲线上查出待测试液中维生素B2的质量，并计算出多维葡萄糖粉试样中维生素B2的百分含量。气相色谱分析技术下次内容：
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